詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用,不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療!
細胞屬性:
方法簡介
公司實驗室分離的豬成骨采用先用短時間消化、后用膠原酶反復消化制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的豬成骨經ALP染色檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 豬成骨原代細胞 | 組織來源 | 顱骨組織 |
英文名稱 | Porcine Osteoblast Cells | 貨號 | YS-01X7025 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
豬成骨細胞分離自顱骨組織;顱骨位于脊柱上方,由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規則骨組成。除下頜骨及舌骨外,其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結,起著保護和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部,內有顱腔,容納腦,共8塊。面顱為顱的前下部分,包含眶、鼻腔、口腔等結構,構成面部的支架,共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞,負責骨基質的合成、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建,骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區域,分泌酸性物質溶解礦物質,分泌蛋白酶消化骨基質,形成骨吸收陷窩;其后,成骨細胞移行至被吸收部位,分泌骨基質,骨基質礦化而形成新骨;破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關鍵。成骨細胞培養不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統疾病的分子和細胞學基礎,也是藥物篩選、生物材料開發和生物工程研究的重要手段。
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 梭形、多角形
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產品:
人羊膜細胞;WISH | 胰島素樣生長因子結合蛋白6抗體 |
植烷酸氧化酶抗體 | P450 2W1抗體 |
早期生長應答蛋白1抗體 | MYC誘導粒體蛋白抗體 |
間隙連接蛋白45抗體 | DENND2A蛋白抗體 |
9號染色體開放閱讀框64抗體 | 組蛋白去乙酰化酶5抗體 |
人肺動脈成纖維細胞 (HPAF)( 5×105 ) | REG3A Others Human 人 REG3A / HIP 人細胞裂解液 (陽性對照) |
羅猴胎腎細胞;MA104 | PROCR Others Cynomolgus 食蟹猴 Epcr / PROCR 人細胞裂解液 (陽性對照) |
NCI-H716(人結直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 MDA-MB-231(癌細胞) | ICOSLG Others Human 人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人胚胎胰腺組織來源細胞;CCC-HPE-2 人支氣管平滑肌細胞培養基 100mL | VNN1 Others Mouse 小鼠 VNN1 / Vanin-1 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CL-0424RK1(大鼠腎細胞)5×106cells/瓶×2 | 豬成骨原代細胞MYC誘導粒體蛋白抗體 |
CNDP2 Others Mouse 小鼠 CNDP2 / CN2 / CPGL 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | tTA基因修飾的小鼠畸胎瘤細胞(B類);F9-CAG-tTA-4D6 |
人多發性骨髓瘤細胞;RPMI-8226 [RPMI8826] | 人腦血管平滑肌細胞 (HBVSMC)( 5×105 ) 人臍動脈內皮細胞 MCF-7(MCF7)(ATCC來源), 人癌細胞 |
PC-12(高分化),PC12,大鼠腎上腺髓質嗜鉻瘤分化細胞株(高分化) 骨肉瘤細胞(瘤株),OS-732細胞 PANC-1(胰腺癌細胞) | 9號染色體開放閱讀框89抗體 |
BTB-kelch蛋白家族4抗體 | CLEC7A Others Human 人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) |
整合素樣金屬蛋白酶與4型抗體 | 前體細胞表達蛋白1抗體 |
半乳糖凝集素8抗體 | 人肺動脈成纖維細胞 (HPAF)( 5×105 ) |