化工儀器網
詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的小鼠陰莖白膜成纖維采用膠原酶-聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的小鼠陰莖白膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 小鼠陰莖白膜成纖維原代細胞 | 組織來源 | 陰莖 |
英文名稱 | Mouse Penile Tunica Albuginea Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X8545 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
小鼠陰莖白膜成纖維細胞分離自陰莖白膜組織；海綿體，又稱海綿體肌，是硬的平滑肌和結締組織。海綿體是一種勃起組織，外面包有堅厚的白膜，內部由結締組織和平滑肌組成海綿狀支架，其腔隙與血管相通。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的陰莖白膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。陰莖白膜成纖維細胞（PLFs）作為牙周膜的主體細胞，是牙周膜主要的間質細胞，它不僅具有合成膠原、基質、彈力纖維和糖蛋白的功能，還有吸收膠原吞噬異物的能力，還參與了牙周組織的病變、修復及再生過程。現在，利用牙周膜細胞建立體外模型，已經成為有關員研究牙周組織疾病的重要手段。
培養信息：
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠陰莖白膜成纖維細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
VERO E6細胞，猴腎細胞系 Lec1(卵巢細胞) 小鼠結締組織L細胞株929克隆;L-929 [L929] | 核糖核苷酸還原酶亞基R2抗體 |
T細胞急性淋巴母細胞白血病相關抗原1抗體 | 細胞外基質蛋白1抗體 |
錨蛋白重復域28抗體 | 電壓門控性鉀通道蛋白亞基KV6.3抗體 |
元引導蛋白3抗體 | 親聯蛋白2抗體 |
血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體 | 甲狀腺激素轉運蛋白/單羧酸轉運蛋白7/8抗體 |
EFNA5 Protein Canine 重組狗 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽) | 小鼠垂體瘤細胞(分泌促生長激素分泌激素);AtT-20 |
293T/17[HEK 293T/17]細胞，人胚腎細胞 人膽管細胞型肝癌細胞,HCCC-9810細胞 CL-0160Molt-4(人急性淋巴母細胞白血病細胞)5×106cells/瓶×2 | 倉鼠卵巢細胞;Lec1 |
大鼠晶狀體上皮細胞培養基 100mL | IL36G Protein Mouse 重組小鼠 IL36G / IL1F9 蛋白 (His 標簽) |
人真皮微血管內皮細胞培養基 100mL | SF-295(人XG惡性膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 |
EB (NBL-4)牛胚氣管細胞 EB (NBL-4) of bovine embryo acheal cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBS | 小鼠陰莖白膜成纖維原代細胞電壓門控性鉀通道蛋白亞基KV6.3抗體 |
VEGFC Protein Rat 重組大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, Fc 標簽) | HA Others Influenza B 乙型流感 (B/Florida/4/2006) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SK-MES-1人肺鱗癌細胞 SK-MES-1 human lung squamous carcinoma cells MEM培養基(GIBCO)+10%FBS | 人臍帶間充質干細胞HUMSC |
表達小鼠MHCⅠ類分子Kb的人胚腎細胞;293KB | 天冬-特異家族抗體 |
鈣調蛋白激酶激酶β抗體 | CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a, His 標簽) |
原鈣粘附蛋白1抗體 | 酸羧化酶抗體 |
類固醇受體激活蛋白2抗體 | EFNA5 Protein Canine 重組狗 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 (Fc 標簽) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
化工儀器網