詳細介紹
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細胞屬性:
方法簡介
實驗室分離的兔直腸平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的兔直腸平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 兔直腸平滑肌原代細胞 | 組織來源 | 直腸 |
英文名稱 | Rabbit Rectal Smooth Muscle Cells | 貨號 | YS-01X8482 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介:
兔直腸平滑肌細胞分離自直腸組織;直腸為大腸的未段,位于小骨盆內。上端平第3骶椎處接續乙狀結腸,沿骶骨和尾骨的前面下行,穿過盆膈,下端以門而終。直腸上端的大小似結腸,其下端擴大成直腸壺腹,是糞便排出前的暫存部位,下端變細接管。直腸在盆腔內的位置與骶椎腹面關系密切,與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶,位于膀胱和生殖器官的背側。直腸平滑肌細胞原代分離培養3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態大小不一,呈梭形、不規則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態學特征和生長特點。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈,來自髂內動脈的直腸中動脈和來自髂內動脈的直腸下動脈。平滑肌收縮是胃腸蠕動中基本的運動方式;腸炎時由于平滑肌特殊肌動蛋白的增加導致了平滑肌層的增厚。平滑肌肌動蛋白可能影響收縮力的產生,這進一步證明了炎癥時的腸平滑肌細胞具有可塑性。利用腸平滑肌細胞的培養,可以幫助了解收縮、增殖和胃腸道結締組織對平滑肌細胞的反應。
培養信息:
培養基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:成纖維細胞樣
傳代特性:可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液:0.25%
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔直腸平滑肌細胞體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞培養方法:
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
操作步驟:
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中,將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片,待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次,4%的多聚甲醛固定爬片15min,再次用PBS浸洗玻片3次,每次3min。
3. 0.5% Triton X-100(PBS配制)室溫孵育爬片20min,使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶,室溫孵育15min(一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫),PBS沖洗3次,每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min,PBS沖洗3次,每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育:按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗,滴加在爬片上,于4°C濕盒中孵育一夜,PBS沖洗3次,每次3min。
7. 二抗孵育:選與一抗對應的二抗,按比例稀釋后滴加在爬片上,37°C濕盒中孵育30min,PBS沖洗3次,每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干,爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下觀察,當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染:用Harris蘇木素復染30s~1min,水洗后用1%的鹽酸酒精分化,再用蒸餾水(或PBS)水洗返藍。
10. 封片:將中性樹膠滴在爬片一側,再用蓋玻片蓋上,先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側,以免產生氣泡,封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產品:
293T細胞,人胚腎T細胞 人卵巢癌細胞,HO-8910細胞 人心肌細胞裂解物HCML | 骨形態發生蛋白15抗體 |
Ras相關區域家族蛋白4抗體 | 細胞分裂周期蛋白16抗體 |
酸肌醇0脂酶PLCZ1抗體 | 蛋白Z抗體 |
保護肽HN抗體 | 胚胎發育相關蛋白Nodal抗體 |
鋅指蛋白274抗體 | 肌側索硬化癥相關蛋白FIG4抗體 |
SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1 | 人結腸粘膜上皮細胞培養基 100mL |
RAW 264.7細胞,小鼠單核巨噬細胞白血病細胞 溶組織梭菌Closidium histolyticum 水牛皮膚成纖維樣細胞;WB-S3 | CCL22 Protein Human 重組人 CCL22 / MDC 蛋白 (His 標簽) |
小鼠胎兒真皮成纖維細胞培養基 100mL | 白細胞介素-17超家族 |
腦動脈血管內皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | CL-0196RKO(人結腸腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
EL4小鼠淋巴瘤細胞 EL4 mouse lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS | 兔直腸平滑肌原代細胞蛋白Z抗體 |
肝內膽管上皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml) | NCI-H1299人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1299 cells in human non small cell lung cancer RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS |
人羊膜上皮細胞(HAEpic)( 5×105 ) C2C12, 小鼠肌原細胞 Mouse | Hep B1.2(人肝癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
小鼠子宮成纖維細胞培養基 100mL | 死亡相關蛋白1抗體 |
非受體酪蛋白激酶2抗體 | 人腎上腺皮質癌細胞;SW-13 |
異質核糖核蛋白U2樣蛋白抗體 | 白細胞介素-19抗體 |
抗菌肽/天蠶素抗體 | SV40轉化的非洲綠猴腎細胞;COS-1 |