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詳細介紹
兔胰島原代細胞
兔胰島細胞分離自胰腺組織；胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有、原、脂肪酶、等。胰液通過胰腺管排入十二指腸，有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。內(nèi)分泌腺由大小不同的細胞團──胰島所組成，胰島主要由4種細胞組成：α細胞、β細胞、γ細胞及PP細胞。α細胞分泌胰高血糖素，升高血糖；β細胞分泌胰島素，降低血糖；γ細胞分泌，以旁分泌的方式抑制α、β細胞的分泌；PP細胞分泌胰多肽，抑制胃腸運動、胰液分泌和膽囊收縮。胰島細胞作為糖尿病新藥的細胞篩選模型需保持其結(jié)構(gòu)完整、生理功能穩(wěn)定和足夠長的存活時間。胰島占胰腺總質(zhì)量的1%-2%，每個胰島大概含有1000個細胞。胰島移植可消除常規(guī)治療產(chǎn)生的嚴重低血糖癥狀，具有創(chuàng)傷小及并發(fā)癥少等優(yōu)點，是有前景的Ⅰ型糖尿病治療方案。移植胰島的獲得需經(jīng)過供體篩選、胰腺消化、胰島分離純化及結(jié)果鑒定等步驟，分離純化效果取決于原料及操作方法的選擇。
英文名稱 | Rabbit Pancreatic Islet Cells | 組織來源 | 胰腺 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7875 |
細胞形態(tài) | 梭形、多角形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：兔胰島細胞
組織來源：胰腺
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：梭形、多角形
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔胰島細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡介
實驗室分離的兔胰島采用膠原酶灌注消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔胰島經(jīng)DTZ染色檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
PG-LH7細胞，人肺巨細胞癌(PG)的低轉(zhuǎn)移亞系 小鼠胚成纖維包裝細胞,ψ2細胞 CL-0026ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細胞)5×106cells/瓶×2 | 骨堿性酸酶抗體 |
RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白A抗體 | 細胞分化周期CDC42蛋白抗體 |
酸化組蛋白去乙?；?span>4(Ser246)抗體 | 膽汁酸受體抗體 |
少突細胞髓0脂糖蛋白抗體 | 扭轉(zhuǎn)原腸胚形成同源蛋白1抗體 |
鋅指蛋白148抗體 | 肌微管素1抗體 |
ST(豬細胞) 5×106cells/瓶×2 | mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞 |
人口腔表皮樣癌細胞;KB 大鼠尿道上皮細胞培養(yǎng)基 100mL | PC-12(低分化) 大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(低分化) |
大鼠周成纖維細胞RPNF | 長白山豬胚胎皮膚成纖維樣細胞;201184 |
大鼠肝細胞;BRL | CL-0191RBE(人膽管癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
NCI-H520[H520]細胞，人肺癌細胞 人膀胱癌細胞,EJ細胞 人心肌細胞HCM | 兔胰島原代細胞膽汁酸受體抗體 |
肝動脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | HSF人皮膚成纖維細胞 HSF in human skin fibroblasts DMEM+10%FBS或者(進口的新生牛血清NCS) |
ICAM2 Others Mouse 小鼠 ICAM2 / CD102 人細胞裂解液 (陽性對照) | IL27 Protein Mouse 重組小鼠 IL27 / Ierleukin-27 蛋白 (His 標簽) |
星形細胞生長添加物AGS | 原活化蛋白激酶組織蛋白1抗體 |
防御素β2抗體 | 人腎皮質(zhì)上皮細胞裂解物HRCEpiCL |
異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體 | 白細胞介素-12受體β1抗體 |
卡波西氏肉瘤皰疹潛伏核抗原相互作用蛋白1抗體 | ST(豬細胞) 5×106cells/瓶×2 |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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