詳細介紹
人椎間盤纖維環原代細胞
人椎間盤纖維環細胞分離自椎間盤組織;椎間盤是位于脊柱兩椎體之間,由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板,是透明軟骨復蓋于椎體上,下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成,位于髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊,使纖維環成為堅實的組織,能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環的前側及兩側較厚,而后側較薄。纖維環的前部有強大的前縱韌帶,后側的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環細胞密度為9000個細胞/mm3,其外層的細胞呈梭型,主要屬于纖維細胞,內層細胞呈圓形,主要屬于軟骨細胞。在培養的情況下,用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現,它們的核較圓,核仁較明顯。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網。細胞質內線粒體多,為橢圓形,有的可看到雙層單位膜,由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒,纖維環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛,保證纖維環生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少,纖維環的生物性能就會減弱,椎間盤開始退變。
英文名稱 | Human Intervertebral Disc Fibroblast Cells | 組織來源 | 椎間盤組織 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 產品貨號 | YS-01X7530 |
細胞形態 | 梭形、多角形 | 生長特性 | 貼壁 |
產品名稱:人椎間盤纖維環細胞
組織來源:椎間盤組織
產品規格:5×10?Cells/T25培養瓶
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
方法簡介
公司實驗室分離的人椎間盤纖維環采用膠原酶-蛋白酶聯合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
公司實驗室分離的人椎間盤纖維環經Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中,T25培養瓶加6-8ml培養基;
⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養基吹勻,將細胞懸液加入培養瓶中,補加適量培養基。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化;
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A5 | Anti-gamma tubulin 微管蛋白-gamma抗體Multi-class antibodies規格: 0.1ml |
IDO(Human indoleamine 2,3-dioxygenase) ELISA Kit 人吲哚胺2,3-雙加氧酶 96T | Anti-MMP-11/FITC 熒光素標記基質金屬蛋白酶-11抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Thyroxine Binding Globulin/TBG/Serpin A7 甲狀腺素結合球蛋白抗體 規格 0.2ml | MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基質金屬蛋白酶1Multi-class antibodies規格: 48T |
Haptoglobulin beta: 結合球蛋白β抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh Cathepsin L/CTSL 組織蛋白酶L抗體 規格 0.1ml |
FLAG Tag (CT): FLAG Tag標簽抗體(C端) 0.1ml | ACTH ELISA Kit 大鼠促腎上腺皮質激素Multi-class antibodies規格: 48T |
CRIP2 Others Human 人 CRIP2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) | CD86 Others Mouse 小鼠 CD86 / B7-2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
人結膜成纖維細胞cDNAHConF cDNA | IL6ST Others Rat 大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CSH1 Others Human 人 CSH1 / Lactogen 人細胞裂解液 (陽性對照) | ABHD4 Others Human 人 ABHD4 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
Eca-109(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0246YAC-1(小鼠淋巴瘤細胞)5×106cells/瓶×2 中國倉鼠肺細胞;V79 | SOST Others Human 人 SOST / Sclerostin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
MSC, 小鼠雪旺細胞 | 人椎間盤纖維環原代細胞MMP-1(Human Matrix metalloproteinase 1) ELISA kit 人基質金屬蛋白酶1Multi-class antibodies規格: 48T |
大鼠星形膠質細胞(RA)(5×105) Caki-1, 人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞 Human | 小型豬腎細胞;MPK |
GBC-SD, 人膽囊癌細胞 | NCL-H548細胞,人胰腺癌細胞 人癌細胞,MDA-MB-231細胞 巨噬細胞培養基MaM |
KLRK1 Others Human 人 NKG2D / CD314 / KLRK1 CHO細胞裂解液 (陽性對照) | Anti-PTPRJ/CD148/DEP1/FITC 熒光素標記CD148抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml |
2-Oct: 胚胎干細胞關鍵蛋白2抗體 0.1ml | RBL-2H3(大鼠嗜堿性細胞白血病細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphA3 人細胞裂解液 (陽性對照) |
SOX6: 核轉錄因子SOX6抗體 0.2ml | phospho-CBL2 (Tyr700): 0酸化原癌基因CBL2抗體 0.1ml |
Rhesus antibody Rh IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的驢抗豚鼠IgG 規格 0.1ml | CRIP2 Others Human 人 CRIP2 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。