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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的人主動脈外膜成纖維采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的人主動脈外膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人主動脈外膜成纖維原代細胞 | 組織來源 | 主動脈 |
英文名稱 | Human Aortic Adventitial Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X8314 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人主動脈外膜成纖維細胞分離自主動脈血管外膜組織；血管外膜是由疏松結締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結締組織細胞以成纖維細胞為主，當血管受損傷時，成纖維細胞具有修復外膜的能力。有的動脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細胞是血管外膜的主要組成細胞之一，其主要生理功能合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。
培養信息：
培養基：基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人主動脈外膜成纖維細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B2 | NAV3： 元引導蛋白3抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh MCKD2/UMOD 尿調節蛋白抗體 規格 0.2ml | Anti-TSARG6/FITC 熒光素標記生精細胞凋亡相關基因6抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
STAT1(signal transducers and activators of transcription 1) 信號轉導與轉錄激活因子1抗原 0.5mg | Anti-Orexin-A 增食欲素-A/欲激素AMulti-class antibodies規格： 0.1ml |
Anti-Galanin/FITC 熒光素標記節肽抗體“甘丙肽"IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | Rhesus antibody Rh SLC25A20 線粒體二羧酸載體蛋白20抗體 規格 0.1ml |
Anti-PHB/FITC 熒光素標記抑制素/抑制因子抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | Anti-AT1R/FITC 熒光素標記血管緊張素Ⅱ-1型受體抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) | BC-022(人癌細胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠漿細胞瘤;MPC-11 |
人結膜成纖維細胞總RNAHConF NA | CAT Others Human 人 CAT / Catalase 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) |
IL18BP Others Mouse 小鼠 IL18BP 人細胞裂解液 (陽性對照) | CD2 Others Canine 狗 CD2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
CD180 Others Human 人 CD180 / RP105 / LY64 人細胞裂解液 (陽性對照) | IgG2a Others Mouse 小鼠 IgG2a-Fc 人細胞裂解液 (陽性對照) |
MTT細胞活力和增殖檢測試劑盒MTT | 人主動脈外膜成纖維原代細胞Anti-Orexin-A 增食欲素-A/欲激素AMulti-class antibodies規格： 0.1ml |
HMGB1 Others Mouse 小鼠 HMGB1 / HMG1 人細胞裂解液 (陽性對照) | RSC96(大鼠雪旺細胞) 5×106cells/瓶×2 |
破骨細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | LAYN Others Human 人 Layilin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
兔源細胞 長鼻袋鼠腎細胞，Pt K1細胞 RBL-1細胞，大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞 | GMIP： GEM相互作用蛋白抗體 0.2ml |
Human apoprotein B100,apo-B100 ELISA Kit 人載脂蛋白B100Multi-class antibodies規格： 48T | EFNB2 Others Human 人 Ephrin-B2 / EFNB2 人細胞裂解液 (陽性對照) |
粘蛋白-1/上皮膜抗原抗體 Anti-mucin-1/Muc-1/CD227 antigen 0.1ml | FT4 ELISA Kit 大鼠游離甲狀腺素 96T |
ARSF： 芳香基酯酶F抗體 0.2ml | HGF Others Mouse 小鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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