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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的人直腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的人直腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 人直腸黏膜上皮原代細胞 | 組織來源 | 直腸組織 |
英文名稱 | Human Rectal Mucosal Epithelial Cells | 貨號 | YS-01X7164 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人直腸黏膜上皮細胞分離自直腸組織；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內(nèi)。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈，下端以門而終。直腸上端的大小似結(jié)腸，其下端擴大成直腸壺腹，是糞便排出前的暫存部位，下端變細接管。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切，與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈，來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用，它決定黏膜免疫反應的發(fā)生、性質(zhì)和強度。
培養(yǎng)信息：
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
Eca-109細胞，人食管癌細胞 人腦瘤細胞,SF126細胞 中國倉鼠卵巢細胞(亞系克隆);CHO Hu 164 SCF 17 | GSK(Mouse glycogen synthase kinase) ELISA KIT 小鼠糖原合成酶激酶 96T |
RASSF3： Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體 0.2ml | Rhesus antibody Rh PXMP1/ABCD3 過氧化物酶膜蛋白1抗體 規(guī)格 0.2ml |
Anti-HDAC10/FITC 熒光素標記組蛋白去乙酰化酶10抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml | C17orf64： 17號染色體開放閱讀框64抗體 0.2ml |
Rhesus antibody Rh BRCA2 癌易感基因2抗體 規(guī)格 0.1ml | Anti-CXCL4/PF-4/FITC 熒光素標記血小板因子4抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml |
胰腺衍生因子抗體 Anti-FAM3B/PANDER 0.1ml | ADH6： 乙醇脫氫酶6抗體 0.2ml |
CA46(人Butts淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 | 人間充質(zhì)干細胞-肝 |
rCF, 大鼠心臟成纖維細胞 A4細胞 HL-7702(肝細胞) | 人結(jié)直腸腺癌細胞;SW480 [SW 480;SW-480] |
大鼠小膠質(zhì)細胞培養(yǎng)基 100mL | IFNG Protein Human 重組人 IFN-gamma / IFNG / γ-IFN 蛋白 |
CM-M069小鼠腎成纖維細胞培養(yǎng)基100mL | CL-0100HEC-1-B(人子宮內(nèi)膜腺癌細胞)5×106cells/瓶×2 |
NUGC-3人胃癌細胞 Human gasic cancer cells NUGC-3 1640+10% FBS | 人直腸黏膜上皮原代細胞C17orf64： 17號染色體開放閱讀框64抗體 0.2ml |
非洲綠猴腎細胞;GL-37 | 雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7B5 小鼠表皮角質(zhì)形成細胞培養(yǎng)基 100mL |
NHDF-c 正常人皮膚成纖維細胞(NHDF)來自少年者 x500,000cells 氣管上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | IL25 Protein Human 重組人 IL25 蛋白 (Fc 標簽) |
大鼠元細胞培養(yǎng)基 100mL | IgG/AP 堿性0酸酶(AP)標記的兔抗大鼠IgG 0.1ml |
Rhesus antibody Rh GRO Alpha/GRO-1/CXCL1 生長調(diào)節(jié)致癌基因-1抗體GROa GROβ 規(guī)格 0.1ml | 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞;MuM-2B |
Phospho-FAK(Tyr576 + Tyr577)： 0酸化粘著斑激酶抗體 0.1ml | Anti-LTB4-R1 白三烯B4受體1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml |
sm Actinin- Alpha(Mouse skeletal muscle Actinin- Alpha) ELISA Kit 小鼠橫紋肌輔肌動蛋白αMulti-class antibodies規(guī)格： 48T | CA46(人Butts淋巴瘤細胞) 5×106cells/瓶×2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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