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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的人羊膜成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的人羊膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人羊膜成纖維原代細胞 | 組織來源 | 羊膜 |
英文名稱 | Human Amniotic Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7968 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人羊膜成纖維細胞分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內膜聯合長成的母子間交換物質的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成。胎兒在子宮中發育，依靠胎盤從母體取得營養，而雙方保持相當的獨立性。胎盤還產生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結構如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結合，以達到母子間物質的交換，這樣的結構稱假胎盤。羊膜是胎盤的內層，與眼結膜組織結構相似，含有眼表上皮細胞，包括結膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質，其光滑，無血管、及淋巴，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜成纖維細胞主要來自基底膜、致密層、纖維母細胞層。
培養信息：
培養基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人羊膜成纖維細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
CEM細胞，白血病細胞 人前列腺癌細胞,PC-3M細胞 人肝內膽管上皮細胞總RNAHIBEpiC NA | Rhesus antibody Rh GFAP 膠質纖維酸性蛋白抗體 規格 0.1ml |
AFP(Human Alpha-fetoprotein) ELISA Kit 人甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白Multi-class antibodies規格： 48T | IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的小鼠抗IgG 0.1ml |
IRS1： 胰島素受體底物-1抗體 0.2ml | LMA(Human anti-liver cell membrane antibody) ELISA Kit 人抗肝細胞膜抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RGAG4 RGAG4蛋白抗體 規格 0.2ml | Anti-Lck/p56-LCK/FITC 熒光素標記淋巴細胞特異性蛋白酪激酶抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Ser192) 0酸化轉化生長因子β活化激酶1 規格 0.1ml | BDNF(Mouse Brain derived neurotrophic facor) ELISA Kit 小鼠腦源性營養因子 96T |
非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 | CM-R040大鼠肝竇內皮細胞培養基100mL |
小鼠T淋巴細胞;Cl.Ly1+2-/9 小鼠肝動脈內皮細胞培養基 100mL | MLF, 小鼠淋巴成纖維細胞 Mouse |
人胚肺成纖維細胞;MRC-5 | COLO 201(人結直腸腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
HEC-1A, 人子宮內膜癌細胞系 | 小鼠肝星形細胞培養基 100mL |
CCC-HEK-1細胞，人胚腎二倍體細胞 鼠逆轉錄酶病毒包裝細胞,PT67細胞 CL-0398NCI-H2452(人間皮瘤細胞)5×106cells/瓶×2 | 人羊膜成纖維原代細胞LMA(Human anti-liver cell membrane antibody) ELISA Kit 人抗肝細胞膜抗體 96T |
CL-0227T-24(人膀胱癌細胞)5×106cells/瓶×2 | SV40T轉化人臍靜脈內皮細胞;PUMC-HUVEC-T1 人膀胱成纖維細胞培養基 100mL |
IGSF8 Others Human 人 PGRL / IGSF8 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H068人膀胱上皮細胞培養基100mL |
ECV-304(人臍靜脈內皮細胞) 5×106cells/瓶×2 | Rhesus antibody Rh APIP/Apaf1 Interacting Protein 凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體 規格 0.2ml |
BACH2： 轉錄調節蛋白BACH2抗體 0.2ml | CM-R058大鼠膀胱上皮細胞培養基100mL |
Anti-TrK A.B.C/TrK /FITC 熒光素標記酪激酶A.B.C抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | PSMD12： 26S蛋白酶調節亞型p55抗體 0.1ml |
Anti-Phospho-cdc2 (Thr14)/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠0酸化周期素依賴激酶1抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | 非洲綠猴腎細胞系/HCV-NS2;Vero-HCV-NS2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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