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詳細介紹
本網站銷售的化學產品僅供科學研究或工業應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
實驗室分離的人外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的人外周血樹突狀細胞經CD86免疫熒光鑒定、 細 胞形態等綜合鑒定，純度可達80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 人外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞) | 組織來源 | 外周血 |
英文名稱 | Human Peripheral Blood Immature Dendritic Cells | 貨號 | YS-01X8307 |
產品規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
人外周血DC細胞分離自外周血，由外周血單核細胞誘導而成的；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未 成熟樹突狀細胞，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長，在GM- CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態不規則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內細胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強的遷移能力，伴隨有部分未誘導成的單核細胞，貼壁形態多樣。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα、LPS等誘導而成，多數呈懸浮生長， 細胞呈圓形，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞。未成熟DC細胞長時間培養也可能導致自發分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志，主要通過形態學、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答，處于啟動、調控、并維持免疫應答的中心環節；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產生免疫應 答，不能激活T細胞的第二信號，可導致T細胞無能，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下。
培養信息：
培養基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細胞形態：圓形、梭形、多角形，形態多樣
傳代特性：屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
人外周血樹突狀細胞(未成熟DC細胞)體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞培養方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。
公司產品：
95-D細胞，高轉移肺癌細胞 人喉癌細胞,M2e細胞 正常大鼠腎細胞;NRK | Rhesus antibody Rh GFP 綠色熒光蛋白(免疫組化用抗體) 規格 0.1ml |
Human Pancreatic carcinoma markers-CA242 ELISA Kit 人胰腺癌標志物CA242Multi-class antibodies規格： 48T | IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的小鼠抗豚鼠IgG 0.1ml |
IASPP： 細胞凋亡ASPP家族的另一個成員抗體 0.1ml | LSP(Human liver specific lipoprotein) ELISA Kit 人抗肝特異性脂蛋白抗體 96T |
Rhesus antibody Rh RGS4 精神分裂癥相關蛋白9抗體 規格 0.2ml | Anti-Phospho-LATS1 (Ser909) /FITC 熒光素標記0酸化抑制基因LATS1抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml |
Rhesus antibody Rh Phospho-TAK1(Thr187) 0酸化轉化生長因子β活化激酶1 規格 0.1ml | SDF-1a/CXCL12(Human Stromal cell derived factor 1a) ELISA Kit 人基質細胞衍生因子1a 96T |
小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2 | BRL-3A 大鼠正常肝細胞 |
CL-0118HT-29(人結腸癌細胞)5×106cells/瓶×2 | 人絨毛間充質成纖維細胞 |
CM-H040人結腸粘膜上皮細胞培養基100mL | RLFs, 大鼠肺成纖維細胞 Rattus |
大鼠小腸隱窩上皮細胞;IEC-6 | 小鼠直腸平滑肌細胞培養基 100mL |
正常小鼠Leydig細胞;TM3 小鼠子宮頸上皮細胞培養基 100mL | 人外周血樹突狀原代細胞(未成熟DC細胞)LSP(Human liver specific lipoprotein) ELISA Kit 人抗肝特異性脂蛋白抗體 96T |
人小細胞肺癌細胞;NCI-H446 | VWC2 Others Human 人 VWC2 / Brorin 人細胞裂解液 (陽性對照) |
IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人細胞裂解液 (陽性對照) | CM-H060人支持細胞培養基100mL |
雜交瘤(B類);C3110D2E11 | Rhesus antibody Rh APNG/MPG N-甲基嘌呤DNA糖基化酶 規格 0.2ml |
BNP： 腦素/利肽抗體 0.1ml | 豹貓肺成纖維樣細胞;LCL2 |
Anti-Rad17/FITC 熒光素標記細胞周期檢控Rad17蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | PKR： 蛋白激酶R抗體 0.1ml |
Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC 熒光素標記CD244抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml | 小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-A2 |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養皿中，將細胞懸液接種于培養皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側再輕輕放下另一側，以免產生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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