大鼠髖臼軟骨原代細胞

大鼠髖臼軟骨細胞分離自髖關節軟骨組織，髖關節是人體最大、的關節之一，是典型的球臼關節。髖關節既具有良好的內在穩定性，也具有靈活的活動性。髖臼位于髖骨外側面中央，呈半球形深凹，直徑約30~50mm，表面覆蓋厚約2mm的透明關節軟骨，呈半月形分布。中央是髖臼窩，無軟骨覆蓋，由哈佛腺充填，可以隨關節內壓力的增減擠出或者吸入關節液，以維持關節內壓力的平衡。髖臼邊緣的環形關節盂唇可以加深、加寬髖臼，使髖臼容納股骨頭的大部并處于穩定的位置，加強了髖關節的穩定性。幼稚的關節軟骨細胞位于關節軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與關節軟骨表面平行，越向深層的關節軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形、染色淺，細胞質弱嗜堿性，常見數量不一的脂滴。成熟的關節軟骨細胞多2-8個成群分布于關節軟骨陷窩內，這些關節軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，關節軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網和發達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，關節軟骨細胞收縮為不規則形，在軟骨囊和細胞之間出現較大的腔隙。體外培養的關節軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

產品名稱：大鼠髖臼軟骨細胞

組織來源：軟骨組織

產品規格：5×10?Cells/T25培養瓶

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細胞形態 梭形、多角形

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠髖臼軟骨采用膠原酶聯合蛋白酶消化制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的大鼠髖臼軟骨經Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養箱繼續消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養基重懸后加入培養瓶或皿中，T25培養瓶加6-8ml培養基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養基吹勻，將細胞懸液加入培養瓶中，補加適量培養基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

兔子血小板活化因子(PAF)ELISA 試劑盒

Rat angiopoietin receptor Tie1 (ANG-R-Tie1) ELISA Kit 大鼠血管生成素受體Tie1(ANG-R-Tie1)試劑盒

Humanhiston-H2bELISAKit 人組蛋白H2b(histon-H2b)試劑盒 進口分裝

Humancytovillin/ezrin,CVL試劑盒人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)試劑盒

組織INSULI激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

Humanplasminogenactivatorinhibitor1，PAI-1ELISAKit人纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒

小鼠K1(VK1)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat osteocalcin / bone gla protein (OT/BGP) ELISA Kit 大鼠骨鈣素/骨谷蛋白(OT/BGP)試劑盒

HumanPeptidylprolylcis/ansisomerase,PPIELISAKit 人肽基脯氨酰順反異構酶(PPI)試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenIerleukin4,IL-4試劑盒雞白介素4(IL-4)試劑盒規格：96T/48T

載玻片細胞IKB-ALPHA蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

Mouseglucoprotein130,gp130ELISAKit小鼠糖蛋白130(gp130)試劑盒規格：96T/48T

小鼠纖溶酶原激活物抑制因子(PAI)試劑盒   96T/48T

小鼠纖溶酶抗纖溶酶復合物(PAP)試劑盒   96T/48T

小鼠纖溶酶/纖維蛋白溶酶(PL/Fbn)試劑盒   96T/48T

小鼠纖連蛋白(FN)試劑盒   96T/48T

G-250快速無毒型蛋白質染色試劑 100ml

Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein 0.5mgTsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein) Tsg101抗原

NCR3重組人 NCR3 / NKp300 蛋白 Protein

IL23 Protein Human 重組人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白

IL1RAP Protein Human 重組人 IL-1RAcP / IL-1R3 蛋白 (His & Fc 標簽)

CES2 Others Mouse 小鼠 CES2 / Carboxylesterase-2 人細胞裂解液   mCF, 小鼠心臟成纖維細胞 小鼠雜交瘤細胞，7F2細胞 EL4. IL-2(淋巴瘤細胞)  BTC Others Mouse 小鼠 BTC / Betacellulin 人細胞裂解液 小鼠原代牙髓干細胞 人原代肺動脈外膜成纖維細胞

大鼠髖臼軟骨原代細胞CDK4(Cyclin Dependent Kinase 4 0.5mlCDK4(Cyclin Dependent Kinase 4) 周期素依賴性激酶4(抗原)

AKR1B1 Protein Human 重組人 AKR1B1 蛋白 (His 標簽)

SERPINF2重組小鼠 SerpinF2 蛋白 (His 標簽) Protein

SFRP4 Protein Mouse 重組小鼠 sFRP4 蛋白 (His 標簽)

HOXA1重組人 HOXA1 蛋白 (His 標簽) Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。