大鼠角膜內(nèi)皮原代細胞

大鼠角膜內(nèi)皮細胞分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細胞層。角膜的高度透明性和光學性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一，而角膜內(nèi)皮細胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細胞是角膜內(nèi)層的單層細胞，構成了后彈力層和房水之間的物理屏障，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài)，保證角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜內(nèi)皮細胞功能出現(xiàn)紊亂，常導致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性。角膜內(nèi)皮細胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能；②角膜內(nèi)皮細胞對角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細胞通過Na+-K+-ATP酶活性，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實質(zhì)層相對脫水狀態(tài)，維持透明性。

產(chǎn)品名稱：大鼠角膜內(nèi)皮細胞

組織來源：眼角膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠角膜內(nèi)皮采用混合膠原酶消化結合內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠角膜內(nèi)皮經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

豚鼠白介素22(IL-22)試劑盒 ，英文名： IL-22 ELISA Kit

Human ubiquitin protein (Ub) ELISA Kit 人泛素蛋白(Ub)試劑盒

RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit 兔子白介素1β(IL-1β)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBeta-EP(RabbitBeta-Endorphin)ELISAKit兔子β內(nèi)啡肽

細菌樣品二維電泳裂解液用于細菌蛋白二維電泳

RabbitGlycatedhemoglobinA1c,A1cELISAKit兔糖化血紅蛋白A1c(A1c)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒 ，英文名： SOD ELISA Kit

Human polymorphonuclear leukocyte elastase (PMN Elastase) ELISA Kit 人多形核白細胞彈性蛋白酶(PMN Elastase)試劑盒

rabbitCarboxyterminalpropeptideoftypeⅠprocollagen,PⅠCPELISAKit 兔子Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforBetaGD(MouseBeta-glucuronidase)ELISAKit小鼠β葡萄糖酸苷酶

細菌纖維素酶(cellulase)活性熒光定量試劑盒20次

RabbitHighmobilitygroupproteinB1,HMGB-1ELISAKit兔子高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人脂肪型脂肪酸結合蛋白試劑盒試劑盒   人脂肪型脂肪酸結合蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂肪型脂肪酸結合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂肪型脂肪酸結合蛋白試劑盒、人脂肪型脂肪酸結合蛋白試劑盒試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人細胞外基質(zhì)0酸糖蛋白試劑盒   人細胞外基質(zhì)0酸糖蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人細胞外基質(zhì)0酸糖蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人細胞外基質(zhì)0酸糖蛋白試劑盒、人細胞外基質(zhì)0酸糖蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人髓樣分化因子初次應答基因88試劑盒   人髓樣分化因子初次應答基因88試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人髓樣分化因子初次應答基因88試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人髓樣分化因子初次應答基因88試劑盒、人髓樣分化因子初次應答基因88 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒   人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G試劑盒、人絲酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子進化枝3G 試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

FGF1重組人 aFGF / FGF1 蛋白 Protein

結合球蛋白(CBG)重組蛋白 Recombinant Corticosteroid Binding Globulin (CBG)

SMR3B重組人 SMR3B 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CDK1 Protein Human 重組人 CDC2 Kinase / CDK1 蛋白 (GST 標簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/Cambodia/S1211394/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白

PLA2G12B重組小鼠 PLA2G12B / PLA2G13 蛋白 (His 標簽) Protein

2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mg2,4-D/BSA 2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)牛血清白蛋白

USP46重組人 / 小鼠 USP46 蛋白 (N-SUMO) Protein

AK4 Protein Human 重組人 AK4 / Adenylate Kinase 4 / AK3L1 蛋白 (His & GST 標簽)

LTBR Protein Rat 重組大鼠 LTBR / ???

大鼠角膜內(nèi)皮原代細胞CREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1 0.5mgCREB-1 (cAMP responsive element binding protein-1) 環(huán)腺苷酸應答元件結合蛋白(抗原)

AK1 Protein Human 重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 (His 標簽)

CD274重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白 (His 標簽) Protein

NTRK3 Protein Mouse 重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 (His 標簽)

CSF3R重組人 G-CSFR / CD114 蛋白 (His 標簽) Protein

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。