細胞增殖及毒性檢測-Cell Counting Kit （CCK試劑盒)

包裝規格產品編號：K009-100、K009-500、K009-1000、K009-3000

規格：100T、500T、1000T、3000T

儲存條件:4℃避光保存，有效期一年。

產品簡介：CellCountingKit簡稱CCK試劑盒，為MTT法的替代方法，是一種基于WST（水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

CCK法與其他檢測方法之間的比較

CCK用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定等

操作說明：

一、制作標準曲線（測定細胞具體數量時）

1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。

2、按比例（例如：1/2比例）依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。

3、接種后培養2-4小時使細胞貼壁，然后加CCK試劑培養一定時間后測定OD值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X軸），OD值為縱坐標（Y軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK后的培養時間。）

二、細胞活性檢測

1、在96孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（在37℃,5%CO2的條件下）。

2、向每孔加入10μL的CCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。

3、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

4、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

5、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

三、細胞增值-毒性檢測

1、在96孔板中配置100μL的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24小時（在37℃，5%CO2的條件下）。

2、向培養板加入10μL不同濃度的待測物質。

3、將培養板在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24或48小時）。

4、向每孔加入10μLCCK溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數）。

5、將培養板在培養箱內孵育1-4小時。

6、用酶標儀測定在450nm處的吸光度。

7、如果暫時不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL0.1M的HCL溶液或者1%w/vSDS溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24小時內吸光度不會發生變化。

注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。

備注：

①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入CCK試劑后的培養時間。

②有條件的情況下建議采用多通道移液器，可以減少平行孔減的差異。加入CCK試劑時，建議斜貼著培養板壁加，不要插到培養基頁面下加，容易產生氣泡，會干擾OD值讀數。

③白細胞可能需要培養較長時間。

④當使用標準96孔板時，貼壁細胞的最小接種量至少為1,000個/孔(100μL培養基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500個/孔(100μL培養基)。如果要使用24孔板或6孔板實驗，請先計算每孔相應的接種量，并按照每孔培養基總體積的10%加入CCK溶液。

⑤如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測靈敏度高

⑥培養基中酚紅的吸光度可以在計算時，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。

活力計算：

細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）]×100

A（加藥）：具有細胞、CCK溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養基和CCK溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細胞、CCK溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力保存條件：4℃干燥避光保存，有效期一年。

僅供科學研究使用，禁止用于它用。