293T貼壁細胞轉染

貼壁細胞siRNA轉染步驟：

1、合成siRNA時請帶熒光，若siRNA不帶熒光、請使用熒光對照，方便查看轉染效率

2、siRNA濃度：20uM/L

3、siRNA和轉染試劑復合物制備：siRNA 8ul和轉染試劑8ul，吹打混勻室溫靜置15分鐘，無需另外加入任何試劑稀釋

4、細胞轉染前狀態：拍明場細胞照片留存

5、貼壁細胞鋪板：6孔板*培養基2ml、培養基中不加雙抗，細胞密度：60%左右（不同細胞，按48小時生長到90%，往前推算細胞鋪板密度）

6、轉染：將復合物加入輕搖混勻、培養箱培養

7、換液：轉染24小時后培養基換液

8、轉染效率：轉染48小時后拍熒光照片，查看轉染效率

9、轉染后細胞狀態：拍明場細胞狀態照片

10、檢測：總計轉染48小時后提取RNA或蛋白檢測

貼壁細胞質粒轉染步驟：

1、質粒提取：使用無內毒素提取試劑盒

2、質粒溶解：溶于超純水或雙蒸水，一定不能溶于試劑盒Buffer等其他試劑

3、質粒熒光：若質粒不帶熒光、請使用熒光對照，方便查看轉染效率

4、質粒濃度：500-600ng/ul

5、質粒和轉染試劑復合物制備：取質粒8ug和轉染試劑8ul混合，吹打混勻室溫靜置15分鐘，無需另外加入任何試劑稀釋

6、細胞轉染前狀態：拍照片留存

7、貼壁細胞鋪板：6孔板*培養基2ml、培養基中不加雙抗，細胞密度：60%左右

8、轉染：將復合物加入輕搖混勻、培養箱培養

9、換液：轉染24小時后培養基換液

10、轉染效率：轉染48小時后拍熒光照片，查看轉染效率

11、轉染后細胞狀態：拍明場細胞狀態照片

12、檢測：總計轉染48小時后提取RNA或蛋白檢測