伊文思藍染色液(0.5%)

產品簡介：

伊文思藍（Evans Blue）又稱偶氮藍，分子式C₃₄H₂₄N₆Na₄O₁₄S₄，分子量為960.80，CAS號為314-13-6。伊文思藍屬于一種常用的偶氮染料制劑，因其分子量大小與血漿白蛋白相近，而且在血液中與血漿白蛋白有很高的親和力，因此在神經科學研究中常被用于示蹤觀察血腦屏障（BBB）的完整性，也用于細胞染色區分活細胞、死細胞，亦可測定血容量。伊文思藍作臨床藥物用于測定血漿和血容量，也可作動脈插管的定位。正常情況下血漿白蛋白無法透過血腦屏障，所以染色后如果神經系統血腦屏障完整，與血漿白蛋白結合的依文思藍無法使其著色。相反，如果神經系統血腦屏障被破壞，依文思藍就可以進入神經系統并使其著色。在熒光波長470nm、540nm處有強峰，680nm處有弱峰。可以使用化學透析法和比色法進行檢測。

伊文思藍與臺盼藍都是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性和細胞是否存活。活細胞不會被染成藍色，而死細胞會被染成淡藍色。伊文思藍染色后，通過顯微鏡下直接計數或顯微鏡下拍照后計數，就可以對細胞存活率進行比較精確的定量，其中0.5%為常用的濃度。活細胞因有外排功能而無法被伊文思藍染色，因此可以通過此方法在顯微鏡下區分死細胞與活細胞，但無法區分死亡與壞死。

自備材料：

1、 注射器、組織勻漿器

2、 PBS

3、 C2HCl3O2或丙酮

操作步驟（僅供參考）：

（一） 血腦屏障通透性

1、 取處理后的實驗動物（以小鼠為例），靜脈注射Evans Blue Stain(0.5%)數秒至1分鐘內，小鼠眼睛、皮膚出現藍色。0.5~1h后處死小鼠，取目的腦組織。

2、 腦組織置于1.5ml離心管中，加入1ml PBS，迅速用組織勻漿器將腦組織制成勻漿，1000g離心15min。

3、 取上清，加入等量C2HCl3O2，4℃孵育18~24h。該步驟亦可采用如下操作：取上清，按上清:丙酮=3:7比例加入丙酮，室溫孵育24h。

4、 1000g離心20~30min或2000g離心15min。

5、 取上述溶液1~2ml，用分光光度計測620nm處吸光值（OD值）。同時測定已知不同梯度的標準文思藍的OD值，繪制標準曲線。根據標準曲線計算出待測樣品的依文思藍含量。

（二） 活細胞染色

1、 取100μl重懸細胞到常規1.5ml或0.5ml離心管內，入100μl Evans Blue Stain輕輕混勻，染色3min（染色時間可適當延長，但不宜超過10min）。

2、 吸取少量經過染色后的細胞，計數。通常如果要比較精確地進行定量，每個細胞樣品至少數500個細胞，數出藍色細胞和細胞總數。細胞存活率計算公式如下：

           細胞存活率=（細胞總數-藍色細胞數）/細胞總數×%

注意事項：

1、 Evans Blue Stain對人體有輕微素性，請小心防護。

2、 細胞染色時，注意凋亡小體偶爾也有拒染現象。

3、 血腦屏障通透性實驗中，Evans Blue Stain注射量應根據不同動物以及動物的重量調整。

4、 采用低溫冷凍離心機進行離心。

5、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

產品組成：