BY-0743 LtK-11C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
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- 型號(hào) BY-0743
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- 更新時(shí)間 2025/7/10 11:59:13
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LtK-11C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞系
LtK-11C3H/An小鼠結(jié)締組織細(xì)胞系源自 C3H/An 近交系小鼠的皮下結(jié)締組織，是 L929 細(xì)胞系的胸苷激酶缺陷突變株，因缺乏功能性胸苷激酶（TK），在基因轉(zhuǎn)染、病毒學(xué)及遺傳毒理學(xué)研究中具有不可替代的價(jià)值。
該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的成纖維細(xì)胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形或紡錘形，貼壁生長(zhǎng)時(shí)排列成平行束狀或漩渦狀，胞質(zhì)豐富，含細(xì)顆粒狀物質(zhì)，細(xì)胞核呈橢圓形，核仁清晰可見(jiàn)，與親本 L929 細(xì)胞形態(tài)高度相似。免疫表型分析顯示，細(xì)胞高表達(dá)成纖維細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白（Vimentin）和 Ⅰ 型膠原蛋白，不表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)志物細(xì)胞角蛋白，明確其間質(zhì)細(xì)胞屬性。其du特的分子特征在于 TK 基因缺失 —— 通過(guò) Southern blot 分析證實(shí)，該細(xì)胞系的 TK 基因存在 2.3kb 片段缺失，導(dǎo)致無(wú)法合成功能性胸苷激酶，這一缺陷使其對(duì)胸苷類似物（如溴脫氧尿苷，BrdU）具有抗性，為篩選基因轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞提供了天然選擇標(biāo)記。
體外培養(yǎng)體系中，LtK-11C3H/An 細(xì)胞展現(xiàn)出穩(wěn)定的生長(zhǎng)性能與遺傳特性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48-72 小時(shí)，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞活力可達(dá) 90% 以上。其顯著特點(diǎn)是對(duì) HAT 選擇培養(yǎng)基（次黃piao呤 - 氨基蝶呤 - 胸苷）高度敏感 —— 因缺乏 TK，無(wú)法利用培養(yǎng)基中的胸苷合成 DNA，在 HAT 中培養(yǎng) 48 小時(shí)后細(xì)胞存活率不足 5%，而導(dǎo)入 TK 基因的轉(zhuǎn)染細(xì)胞則可在 HAT 中正常生長(zhǎng)，這種 “選擇性存活” 特性使其成為基因轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的經(jīng)典宿主細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 10?3-10??，顯著高于其他細(xì)胞系。此外，該細(xì)胞系凍存復(fù)蘇效率高，液氮凍存后復(fù)蘇存活率超過(guò) 85%，連續(xù)傳代 50 次后，TK 缺陷表型與形態(tài)特征無(wú)明顯改變，保證了實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性。
LtK-11C3H/An 細(xì)胞的核心價(jià)值體現(xiàn)在其作為基因轉(zhuǎn)染模型的du特優(yōu)勢(shì)。作為 TK 缺陷株，其可通過(guò)導(dǎo)入含 TK 基因的重組載體實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞篩選，這種基于代謝缺陷的篩選系統(tǒng)具有特異性高、背景低的特點(diǎn)，廣泛用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定。例如，在重組腺病毒包裝中，將含目的基因與 TK 基因的穿梭載體轉(zhuǎn)染該細(xì)胞后，HAT 篩選可高效獲得重組病毒包裝細(xì)胞，病毒滴度可達(dá) 10? PFU/mL 以上，顯著縮短實(shí)驗(yàn)周期。同時(shí)，其可用于研究基因表達(dá)調(diào)控 —— 通過(guò)構(gòu)建含不同啟動(dòng)子的 TK 表達(dá)載體，比較 HAT 中細(xì)胞集落形成率，可定量評(píng)估啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄活性，這種方法被廣泛用于啟動(dòng)子強(qiáng)度分析與順式作用元件鑒定。
在病毒學(xué)研究中，該細(xì)胞系是多種 DNA 病毒的敏感宿主。其對(duì)單純皰疹病毒（HSV）、水痘 - 帶狀皰疹病毒（VZV）等具有高度易感性，感染后可出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），如細(xì)胞變圓、融合形成多核巨細(xì)胞，且支持病毒的高效復(fù)制，病毒滴度可達(dá) 10? PFU/mL 以上。HSV 感染實(shí)驗(yàn)顯示，病毒在該細(xì)胞中復(fù)制周期為 12-18 小時(shí)，釋放的病毒顆粒具有完整感染性，這種特性使其成為病毒復(fù)制機(jī)制研究與抗病du藥物篩選的理想模型。此外，其 TK 缺陷特性可用于研究病毒 TK 的功能 ——HSV 編碼的 TK 可彌補(bǔ)該細(xì)胞的代謝缺陷，使感染細(xì)胞在 HAT 中存活，通過(guò)比較野生型與 TK 缺失突變株病毒的存活能力，可精準(zhǔn)評(píng)估病毒 TK 的生物學(xué)功能。
在遺傳毒理學(xué)研究中，LtK-11C3H/An 細(xì)胞是檢測(cè)基因突變的標(biāo)準(zhǔn)工具。基于其 TK 基因缺陷，可通過(guò)回復(fù)突變實(shí)驗(yàn)檢測(cè)受試物的致突變性 —— 當(dāng)細(xì)胞接觸致突變物后，部分細(xì)胞的 TK 基因突變可回復(fù)為功能性基因，這些回復(fù)突變細(xì)胞能在含 BrdU 的培養(yǎng)基中存活（BrdU 對(duì)正常 TK?細(xì)胞具有毒性），通過(guò)計(jì)數(shù)存活集落數(shù)可定量評(píng)估致突變強(qiáng)度。該模型對(duì)多種誘變劑敏感，如紫外線照射可使回復(fù)突變率升高 10-20 倍，環(huán)lin酰胺代謝物可使突變率升高 30 倍，被納入國(guó)際遺傳毒理學(xué)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)體系（OECD 指南）。
在細(xì)胞生物學(xué)基礎(chǔ)研究中，該細(xì)胞系常用于探究 DNA 合成與修復(fù)機(jī)制。因缺乏 TK，其 DNA 合成依賴于補(bǔ)救途徑中的次黃piao呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HPRT），通過(guò)同位素標(biāo)記次黃piao呤可特異性追蹤 DNA 合成過(guò)程，研究顯示其 S 期持續(xù)時(shí)間約為 6 小時(shí)，與正常成纖維細(xì)胞一致。同時(shí)，其可用于 DNA 修復(fù)缺陷研究 —— 紫外線照射后，細(xì)胞的核苷酸切除修復(fù)能力較親本 L929 細(xì)胞無(wú)顯著差異，而導(dǎo)入 XPA 基因缺陷的 cDNA 后，修復(fù)效率下降 60%，證實(shí) XPA 在核苷酸切除修復(fù)中的關(guān)鍵作用。
在生物制藥領(lǐng)域，LtK-11C3H/An 細(xì)胞是重組蛋白表達(dá)的高效平臺(tái)。利用其高轉(zhuǎn)染效率與穩(wěn)定表達(dá)特性，可構(gòu)建分泌型重組蛋白表達(dá)細(xì)胞株，如重組ren干擾素 -β 的表達(dá)量可達(dá) 500 IU/mL，且蛋白糖基化修飾與天然蛋白一致。同時(shí)，其可用于病毒疫苗生產(chǎn)，如基于該細(xì)胞系制備的 HSV 疫苗，經(jīng)純化后免疫小鼠可產(chǎn)生高效價(jià)中和抗體（滴度＞1:1000），保護(hù)率達(dá) 90% 以上，為病毒疫苗研發(fā)提供了可靠的生產(chǎn)基質(zhì)。
隨著基因編輯技術(shù)的發(fā)展，該細(xì)胞系與 CRISPR/Cas9 技術(shù)結(jié)合產(chǎn)生了更精準(zhǔn)的研究模型。通過(guò)敲除 HPRT 基因，構(gòu)建 TK?/HPRT?雙缺陷株，可實(shí)現(xiàn)基于 HAT 與 6 - 硫代鳥(niǎo)piao呤的雙重篩選，顯著提高基因編輯效率；而定點(diǎn)整合 TK 基因至特定染色體位點(diǎn)，可建立穩(wěn)定的單拷貝表達(dá)模型，用于研究基因表達(dá)的位置效應(yīng)。這些基因工程化細(xì)胞系進(jìn)一步拓展了 LtK-11C3H/An 模型的應(yīng)用邊界，使其在分子生物學(xué)與生物技術(shù)領(lǐng)域持續(xù)發(fā)揮重要作用。
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