BY-0283 HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0283
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- 更新時(shí)間 2025/7/17 16:58:51
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HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞系
HBL-100人整合SV40基因的乳腺上皮細(xì)胞系細(xì)胞系是研究乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化及病毒致癌機(jī)制的du特模型，以穩(wěn)定整合 SV40 大 T 抗原基因、保留部分正常乳腺上皮表型及潛在轉(zhuǎn)化能力為核心特征，在乳腺上皮細(xì)胞永生化機(jī)制、病毒 oncogene 作用及乳腺癌早期發(fā)生研究中應(yīng)用廣泛，為解析乳腺上皮細(xì)胞從正常到惡性轉(zhuǎn)化的早期事件提供了可靠實(shí)驗(yàn)工具。
來源與背景：該細(xì)胞系于 1974 年從健康女性的乳腺組織中分離，通過整合猿猴病毒 40（SV40）的大 T 抗原基因?qū)崿F(xiàn)永生化，是首ge被證實(shí)穩(wěn)定表達(dá) SV40 大 T 抗原的人乳腺上皮細(xì)胞系。與原發(fā)性乳腺癌細(xì)胞系（如 MCF-7）相比，其源自正常乳腺組織，經(jīng)病毒基因修飾后既保留部分正常乳腺上皮特性，又具備永生化特征，尤其適合研究乳腺上皮細(xì)胞的永生化機(jī)制及病毒致癌基因的作用。作為連接正常乳腺上皮與惡性轉(zhuǎn)化的過渡模型，HBL-100 的建立填bu了乳腺上皮細(xì)胞永生化研究的空白，至今仍是探討病毒與乳腺癌關(guān)聯(lián)及上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化早期事件的重要參照。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型的上皮樣特征，貼壁生長且排列緊密呈鋪路石樣，細(xì)胞呈多邊形，細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核相對(duì)規(guī)則，核仁不明顯，核質(zhì)比約 1:1.5，形態(tài)接近正常乳腺上皮細(xì)胞，但核分裂象略多于正常細(xì)胞。核心特性體現(xiàn)為SV40 大 T 抗原穩(wěn)定表達(dá)，免疫印跡檢測(cè)顯示大 T 抗原持續(xù)高表達(dá)，該蛋白可與 p53、Rb 等抑癌蛋白結(jié)合并使其失活，這一特征是細(xì)胞永生化的關(guān)鍵；部分正常表型保留，表達(dá)乳腺上皮標(biāo)志物 CK18、CK19，陽性率分別為 90%、85%，同時(shí)表達(dá)上皮細(xì)胞黏附分子 E - 鈣粘蛋白，維持一定的細(xì)胞間連接，與正常乳腺上皮細(xì)胞的表型差異較小；有限惡性潛能，體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 72-96 小時(shí)，克隆形成率約 25%，裸鼠皮下接種成瘤率僅 10%，且成瘤速度極慢，6 周腫瘤體積約 0.2±0.1 cm3，遠(yuǎn)低于惡性乳腺癌細(xì)胞系，表明其惡性程度低，處于轉(zhuǎn)化早期階段。傳代時(shí)采用常規(guī)消化液處理，因貼壁牢固，需消化 5-6 分鐘，傳代比例 1:2-1:3，連續(xù)傳代 100 次后仍保持 SV40 大 T 抗原表達(dá)及上皮形態(tài)，未出現(xiàn)明顯惡性進(jìn)展。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 抗菌劑及 5μg/ml 胰島素，培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。細(xì)胞對(duì)胰島素依賴明顯，去除胰島素后增殖速率下降 40%，細(xì)胞形態(tài)變得扁平。細(xì)胞密度維持在 30%-70%，過度匯合會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞接觸抑制明顯，增殖停滯。對(duì)血清質(zhì)量敏感，低質(zhì)量血清可使細(xì)胞凋亡率從 5% 升至 20%，傳代時(shí)用含血清培養(yǎng)基終止消化，凍存液推薦含 10% DMSO 的胎牛血清，復(fù)蘇后存活率可達(dá) 80% 以上，24 小時(shí)貼壁率超過 90%，細(xì)胞功能恢復(fù)正常。
檢測(cè)鑒定：經(jīng)微生物篩查，無支原體、細(xì)菌、真菌及常見病毒污染，符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示 CK18、CK19 陽性，ER、PR 陰性，與正常乳腺上皮細(xì)胞的激素受體表型一致。PCR 及測(cè)序證實(shí) SV40 大 T 抗原基因穩(wěn)定整合于細(xì)胞基因組，且無其他致癌基因的異常激活。染色體核型分析呈現(xiàn)近二倍體核型，存在少數(shù)染色體數(shù)目異常，但結(jié)構(gòu)畸變較少，與正常乳腺上皮細(xì)胞的核型差異較小。功能驗(yàn)證中，p53 蛋白檢測(cè)顯示其與大 T 抗原形成復(fù)合物，失去正常轉(zhuǎn)錄活性，證實(shí)大 T 抗原的功能活性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在永生化機(jī)制研究中，揭示 SV40 大 T 抗原通過滅活 p53 和 Rb 通路使乳腺上皮細(xì)胞突破增殖極限，為 “病毒蛋白 - 抑癌蛋白失活 - 永生化” 機(jī)制提供直接證據(jù)。在病毒致癌研究中，用于探索 SV40 大 T 抗原與乳腺上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)聯(lián)，發(fā)現(xiàn)長期培養(yǎng)中該細(xì)胞系可自發(fā)出現(xiàn)染色體不穩(wěn)定性，為病毒基因啟動(dòng)轉(zhuǎn)化提供線索。在藥物篩選方面，作為評(píng)估化學(xué)致癌物誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化的模型，研究顯示苯并芘處理可使細(xì)胞克隆形成率提升至 45%，部分細(xì)胞獲得更強(qiáng)的侵襲能力。此外，該細(xì)胞系可用于乳腺上皮細(xì)胞功能研究，如乳腺球蛋白的合成與分泌調(diào)控，為理解正常乳腺生理功能提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
與其他乳腺細(xì)胞系相比，HBL-100 的優(yōu)勢(shì)在于其du特的 “正常 - 永生化” 過渡特征及 SV40 大 T 抗原的穩(wěn)定表達(dá)，能更真實(shí)地模擬乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化的早期階段。通過該細(xì)胞系的研究，已闡明多個(gè)調(diào)控乳腺上皮永生化的關(guān)鍵基因，為解析乳腺癌發(fā)生的早期機(jī)制及病毒致癌作用提供了扎實(shí)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，持續(xù)推動(dòng)乳腺腫瘤發(fā)生機(jī)制研究的發(fā)展。
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