諾博萊德 超純土壤基因組DNA快速提qu試劑盒 核酸提取

超純土壤基因組DNA快速提取試劑盒

目錄號：40217

v適用范圍：

適用于快速提取各種土壤基因組DNA

v 試劑盒組成、儲存、穩定性：

本試劑盒在室溫儲存12個月不影響使用效果。

儲存事項:

1.   溶液LYS或者抑制物去除液IR低溫時可能出現析出和沉淀，可以在37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用,注意不要劇烈搖晃，以免產生大量氣泡。

2.   為避免降低活性，方便運輸，提供蛋白酶K為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入1毫升滅菌水溶解，因為反復凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量(20微升)分裝凍存，－20℃保存。

3.   避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

v產品介紹：

普通的手提或者試劑盒提取的土壤基因組DNA由于常常殘留有PCR的強烈抑制物如腐殖酸、棕黃酸等雜質造成實驗失敗，此外，由于采用了劇烈的玻璃珠擊打來破裂菌體，常常造成DNA剪切和降解。本公司經過長期研發開發出了具有自主知識產權的土壤基因組DNA，通過專li配方的腐殖酸和棕黃酸去除試劑配合特殊處理的純化柱，可以最da程du的去除這些雜質，同時加上多次柱漂洗，確保得到的DNA具有極gao純度，此外獨te的抽提和裂解體系可以迅速裂解細胞（壁）和滅活細胞內核酸酶，不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性。

v 產品特點：

1.本公司獨you的專li配方和純化柱能有效去除腐殖酸等雜質。

2.不需要借助玻璃珠破壁，有效保證了基因組DNA的完整性，長度可達30kb-50kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各種酶切反應。

3.兼容性強，適用于各種不同的土壤包括淤泥等提取困難的土壤。

4.多步驟去除各種雜質和抑制物，保證了極gao純度，OD260/OD280典型的比值達1.7～1.9。

5. 不需要使用有毒的ben酚等試劑，也不需要乙醇沉淀等步驟。

6. 快速，簡捷，單個樣品操作一般可在60分鐘內完成。

v  注意事項：

1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉速可以達到13,000rpm的傳統臺式離心機，如Eppendorf 5415C 或者類似離心機。

2. 開始實驗前根據需要將水浴預熱到37℃或者70℃備用。

3. 溶液S3和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。

洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫，但應該確保批pH大于7.5，pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。

v  操作步驟：（實驗前請先閱讀注意事項）

提示：第一次使用前請先在漂洗液WB和溶液S3中加入指ding量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!

1. 取0.2克土壤放入離心管，用牙簽或者槍頭搗碎后加入0.5ml溶液SUS，用槍頭攪拌后短暫渦旋幫助重懸。

如果預計土壤里面含有較多難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌，可先在0.5ml溶液SUS里面加入10mg的rong菌酶，吹打混勻后再加入，并加做步驟2。

2.（可選步驟）:37℃溫育30分鐘，每10分鐘顛倒混勻幾次。

對于難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌含量豐富的土壤，并在上一步驟加入了rong菌酶的樣品，需要加做此步驟來幫助裂解。

3.加入20μl蛋白酶K (20mg/ml)溶液，短暫渦旋幫助混勻。

可選做步驟:為提高產量，可以在37℃振蕩10分鐘或者渦旋振蕩2分鐘。（注意渦旋振蕩可能剪切DNA）

4. 加入120μl溶液LYS，短暫渦旋混勻，65℃溫育30分鐘，期間顛倒混勻幾次。

65℃溫育時間可以根據具體樣品種類和產量進行延長或者縮短以取得優良產量和純度，可在10分鐘－2小時范圍內調整。

5. （可選步驟）:于－70℃冷凍，65℃融化，反復3次。

對于難裂解的菌類如革蘭氏陽性菌含量豐富的土壤， 可加做此步驟來幫助裂解。

6.  顛倒混勻后，13,000 rpm離心2分鐘,小心轉移上清至新的離心管（記錄上清體積）。

7.加入1/3(三分之一)體積的溶液S1,顛倒幾次，渦旋5秒混勻后，冰上放置5分鐘。

8.13,000 rpm離心5分鐘,小心轉移上清至新的離心管（記錄上清體積）。

9.加入1/3(三分之一)體積的溶液S2,顛倒幾次，短暫渦旋混勻后，冰上放置5分鐘。

該步驟主要是進一步去除humic substance等PCR抑制物質以提高純度，但是會降低一些產量，如果對產量要求高或者提取的DNA不用于PCR，可以嘗試略去此步驟以提高產量。如果預計土壤成份復雜PCR抑制物質多，可以適當提高S2加入量(如加入等體積的S2)，可以提高純度，但是注意也會顯著降低產量。

10.13,000 rpm離心5分鐘,小心轉移上清至新的離心管（記錄上清體積）。

11.加入1.5倍體積的溶液S3（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,顛倒幾次，短暫渦旋混勻。

12.將上一步混合物700μl（包括可能有的沉淀）加入一個吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中），12,000rpm離心30-60秒，倒掉收集管中的廢液。重復直到所有的混合物都加完。

13.加入500μl抑制物去除液IR，12,000 rpm 離心30秒，棄廢液。

14.加入700μl漂洗液WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm離心30秒，棄掉廢液。

15.加入500μl漂洗液WB，12,000 rpm 離心30秒，棄掉廢液。

16.將吸附柱AC放回空收集管中，13,000 rpm離心2分鐘，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。

17.取出吸附柱AC，放入一個干凈的離心管中，在吸附膜的中間部位加100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中預熱效果更好），室溫放置3-5分鐘，12,000rpm離心1分鐘。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，室溫放置2分鐘，12,000rpm離心1分鐘。

洗脫體積越大，洗脫效率越高，如需要DNA濃度較高，可以適當減少洗脫體積，但是最小體積不應少于50μl，體積過小降低DNA洗脫效率，減少DNA產量。

18. DNA可以存放在2-8℃,如果要長時間存放，可以放置在－20℃。

超純土壤基因組DNA快速提qu試劑盒 核酸提取