諾博萊德 通用型彩色DNA純化回收試劑盒 核酸提取

Universal Color DNA Purification Kit通用型彩色 DNA 純化回收試劑盒

目錄號:43018

產品內容：

自備試劑：

無水乙醇

保存條件：

室溫（15 ~ 25℃）

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

產品簡介：

本試劑盒既能從TAE 或TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化 PCR 產物，滿足多種實驗需要。Buffer GS 溶液中含有 pH 指示劑，可根據顏色來判斷溶膠或 PCR 產物回收是否達到優良狀態。使用本產品可回收 100bp~8kb 大小的DNA 片段，回收率可達 80%，該試劑盒操作簡便，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測序等實驗。

產品特點：

1.         快速：步驟少，操作簡便，整個操作僅需 15 分鐘。

2.          高效：每個離心吸附柱可吸附 10 ug 以上的 DNA 片段，回收效率在 85%以上。

注意事項：

1.   Buffer BL 的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩定性，消除高溫潮濕或其他不良環境因素對吸附柱造成的影響。

2.  使用前請先檢查Buffer BL、Buffer GS 是否出現渾濁，如有混濁現象，可在 37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。
       3.  溶液Buffer GS 含有 pH 指示劑，為黃色，指示 pH≤7.5。

4.  切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對 DNA 造成損傷。

5.    回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。

操作步驟：

第一次使用前，請先在 Buffer WB2 中加入無水乙醇，并打對勾標記，加入體積請參照瓶上的標簽。

一、從瓊脂糖凝膠中回收DNA 片段

1.   柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）

2.   切膠：在長波紫外燈下，用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含 DNA 的凝膠。

3.   稱重：將切下的含有目的 DNA 條帶的凝膠，放入 1.5 ml 離心管中，稱取凝膠重量（去除空管重量）。如果凝膠重量為 100mg，其體積可視為 100ul。

4.    溶膠：加入等體積 Buffer GS，60℃水浴，每隔 2 ~ 3 min 上下振蕩，直到凝膠完quan溶解。

（如果凝膠濃度大于 2%，應加入 2 倍體積 Buffer GS。對于回收<300 bp 的小片段，可在凝膠完quan溶解后，再加入 0.5 倍膠塊體積的異丙醇以提高回收率。）

5.   吸附：待溶液冷卻至室溫后加入吸附柱中，室溫靜置 2 min，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（如果總體積超過 750 ul，可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中）

6.   漂洗：加入 500 ul 漂洗液Buffer WB2，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

7.    二次漂洗：重復操作步驟 6。

8.   干燥：將吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩干膜上殘留的乙醇，防止其抑制下游反應。

9.   回收：將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。

（注意：為增加回收效率，可將洗脫液在 65℃預熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。）

二、 從 PCR 反應液或酶切反應液中回收 DNA 片段

1.  柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul 平衡液Buffer BL，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）

2. 加結合液：估計PCR 反應液或酶切反應液的體積，向其中加入等體積溶液Buffer GS，充分混勻。

（注意：對于回收小于 150bp 的小片段可將溶液 Buffer GS 的體積增加到 3 倍以提高回收率）

3.   吸附：將上一步所得溶液加入一套吸附柱中，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

（ 注意：吸附柱容積為 750ul，若樣品體積大于 750ul，可分批加入）

4.    漂洗：加入 500ul Buffer WB2，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液。

5.   二次漂洗：重復操作步驟 4。

6.   干燥：將吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 離心 2 min，甩干膜上殘留的乙醇，防止其抑制下游反應。

7.   洗脫：將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脫液Buffer EB，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min，收集 DNA 片段。（注意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。）

通用型彩色DNA純化回收試劑盒 核酸提取