您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:北京百泰派克生物科技有限公司>>檢測技術(shù)服務(wù)>>單細(xì)胞分析>> 單細(xì)胞蛋白組如何高通量定量?TMT標(biāo)記全
產(chǎn)品型號
品 牌百泰派克
廠商性質(zhì)其他
所 在 地北京市
更新時間:2025-08-12 16:43:33瀏覽次數(shù):9次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)單細(xì)胞蛋白組如何高通量定量?TMT標(biāo)記全
單細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)分析策略與工具推薦
價格 | 詢價 |
---|
細(xì)胞是生命活動的基本單元,然而即使同源細(xì)胞在相同環(huán)境中也可能呈現(xiàn)出顯著的功能差異。這種細(xì)胞間異質(zhì)性在癌癥、免疫、發(fā)育等研究中被認(rèn)為具有重要生物學(xué)意義。單細(xì)胞RNA測序近年來發(fā)展迅速,TMT標(biāo)記(Tandem Mass Tag)成為單細(xì)胞dànbáizhì組定量中廣泛采用的核心策略,憑借其高通量、多通道定量能力,為單細(xì)胞蛋白組分析打開新局面。
一、什么是TMT標(biāo)記?
TMT是同位素編碼的化學(xué)標(biāo)簽,能夠與肽段上的氨基反應(yīng),實現(xiàn)多樣本的混合檢測。每一個TMT標(biāo)簽由質(zhì)量報告離子部分組成,在質(zhì)譜中經(jīng)過高能碎裂后釋放出不同的報告離子,從而對各樣本來源的肽段進行定量。這種“共混檢測、分離定量"的策略極大提升了質(zhì)譜的通量與比較能力,尤其適用于樣本量極低、需要并行分析多個單元的研究場景。在單細(xì)胞蛋白組中,研究人員通常將多個單細(xì)胞樣本與一個高量“載體通道"(carrier channel)共同標(biāo)記,利用載體中的高信號增強MS1的檢測效率,再通過MS2或MS3的碎裂譜圖讀取各通道的報告離子強度,實現(xiàn)jīngquè定量。
二、單細(xì)胞TMT定量的核心流程解析
1、單細(xì)胞分離與裂解
單細(xì)胞蛋白組分析的dìyī步是從組織或細(xì)胞群中分離單個細(xì)胞。常見方法包括流式分選(FACS)、微流控芯片、自動化移液系統(tǒng)等。分離后的細(xì)胞立即裂解,防止蛋白降解或修飾狀態(tài)變化。由于dànbáizhì濃度極低,裂解緩沖液需兼顧高效性與兼容性,盡可能減少蛋白吸附與樣品損失。同時使用低結(jié)合耗材、微量試劑、控制裂解反應(yīng)時間等細(xì)節(jié)也對數(shù)據(jù)質(zhì)量至關(guān)重要。
2、蛋白酶解與TMT標(biāo)記
裂解后的dànbáizhì需在微量體系下完成還原、烷基化和酶解步驟。為提高效率,研究者常采用微量優(yōu)化版yídànbáiméi,并縮短反應(yīng)時間以防止非特異降解。酶解完成后,肽段與TMT標(biāo)簽反應(yīng)。不同單細(xì)胞樣本用不同TMT標(biāo)簽標(biāo)記,隨后在等比例條件下混合,加入載體通道,形成zuì終的TMT混合樣品。這個混合過程要求jígāo的準(zhǔn)確性,比例失衡可能造成定量誤差,甚至引入系統(tǒng)性偏倚。
3、肽段純化與質(zhì)譜檢測
標(biāo)記完成的樣品需進行純化去除多余試劑,常用SP3磁珠或StageTip固相提取方法。由于單細(xì)胞肽段量極少,每一步操作都需謹(jǐn)慎控制,避免肽段丟失。質(zhì)譜分析階段,通常采用高靈敏、高分辨的儀器平臺如Orbitrap系列,通過數(shù)據(jù)依賴采集(DDA)模式進行肽段識別和報告離子定量。為進一步提升定量精度,常結(jié)合SPS-MS3技術(shù),有效降低同位素干擾與共碎裂誤差。
4、數(shù)據(jù)處理與定量分析
TMT數(shù)據(jù)的分析流程包括原始譜圖解碼、肽段鑒定、報告離子提取、信號歸一化和統(tǒng)計分析。對于單細(xì)胞數(shù)據(jù),還需特別處理載體通道干擾、缺失值填補與批次效應(yīng)校正。在結(jié)果解讀階段,可進一步結(jié)合功能富集分析、聚類算法、差異表達分析等方法,揭示細(xì)胞狀態(tài)分布、功能通路激活及蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò),從而還原單細(xì)胞dànbáizhì層面的生物圖譜。
三、TMT在單細(xì)胞蛋白組中的優(yōu)勢
TMT標(biāo)記技術(shù)為單細(xì)胞蛋白組提供了可能的解決方案,其主要優(yōu)勢包括:
可在單次實驗中并行分析10-18個樣本,顯著提高數(shù)據(jù)通量;
混合測量減少批次變異,有利于跨樣本定量比較;
搭配gāoduān質(zhì)譜平臺,可檢測千級別以上的蛋白種類。
TMT標(biāo)記技術(shù)為單細(xì)胞dànbáizhì組學(xué)的高通量定量提供了堅實的工具基礎(chǔ)。它不僅有效提升了微量樣本的檢測能力,也兼顧了數(shù)據(jù)一致性與通量需求,為探索細(xì)胞異質(zhì)性、疾病機制與藥物反應(yīng)提供了jígāo的分辨率。隨著質(zhì)譜技術(shù)的演進與樣品處理流程的標(biāo)準(zhǔn)化,TMT在單細(xì)胞蛋白組領(lǐng)域的應(yīng)用正不斷擴展,其潛力遠(yuǎn)不止于科研探索,更有望推動jīngzhǔn醫(yī)療、生物標(biāo)志物開發(fā)等臨床轉(zhuǎn)化路徑。百泰派克生物科技持續(xù)關(guān)注前沿蛋白組技術(shù)發(fā)展,致力于打造高質(zhì)量的單細(xì)胞蛋白組分析解決方案,助力科研工作者從微尺度揭示生命的本質(zhì)。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù),包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),對蛋白序列進行分析。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.采用目前世界上先進的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;
2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;
3.質(zhì)譜分析靈敏度高,實驗結(jié)果重復(fù)度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,采用金屬元素標(biāo)記物(通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體)標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞,再用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.技術(shù)先進,填補技術(shù)空白
采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。
2.分析數(shù)量大,成本較低
單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,而流式質(zhì)譜技術(shù)一次(單樣本)就可分析至少10^5的細(xì)胞,實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。
3.應(yīng)用前景大
①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進行免疫肽組學(xué)分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標(biāo)。
百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),MALDI TOF,高效色譜分離技術(shù),提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,建立了完備的質(zhì)量體系,數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,設(shè)備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。
1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù);
2.獲國家CNAS實驗室認(rèn)可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù);
3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等;
4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,滿足您一站式服務(wù)需求;
5.服務(wù)3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。