單克隆抗體De Novo測序的完整流程檢測技術服務詳情介紹

一、為什么要對單克隆抗體進行De Novo測序？

在抗體藥開發與研究中，獲取全長抗體氨基酸序列是基礎起點。然而，在以下情境中，常規的基因測序路徑難以奏效：1、抗體僅有純化蛋白，無法獲得B細胞或mRNA；2、抗體來自外部渠道、文獻報道或商業來源，缺乏原始序列信息；3、早期研發階段或體內篩選出的克隆，需結構回溯驗證；4、zhuānlì保護或一致性驗證中，需要“看得見"的分子結構。此時，基于質譜的單克隆抗體De Novo測序成為科學的解決方案。該技術能夠在沒有參考序列的前提下，重建出抗體的輕鏈（LC）與重鏈（HC）全長序列，覆蓋CDR區域，并輔助后續的重組表達與功能驗證。

二、單克隆抗體De Novo測序的標準流程概覽

1、抗體樣本準備與質量評估

首先需要獲得高純度的抗體蛋白樣本。建議提供≥20 µg的抗體溶液或清晰SDS-PAGE條帶。如原樣本為上清、血清等復雜背景，建議進行Protein A/G純化或PAGE切膠純化。百泰派克提供完整的上游處理服務，確保進入質譜分析前的樣本質量穩定、背景低、雜蛋白干擾少。

2、多酶酶解策略設計

酶解是影響抗體序列覆蓋度的關鍵因素。傳統單一酶（如Trypsin）可能無法有效切割CDR區或疏水區，導致覆蓋盲區。因此，項目將采用3~5種不同專一性的蛋白酶（如Trypsin、Chymotrypsin、AspN、LysC、GluC）進行并行消化。多酶聯用能生成高重疊率、多角度切割的肽段集合，為后續拼接提供堅實基礎。

3、LC-MS/MS高分辨率質譜采集

將不同酶解體系的肽段樣品分批進行納流液相色譜分離（NanoLC），并使用高分辨率質譜平臺（如Orbitrap Fusion Lumos、timsTOF Pro等）進行串聯質譜采集。通過HCD、CID、ETD等多種碎裂模式，獲取肽段在MS/MS層面的b/y離子信息，為De Novo算法提供基礎原始數據。

4、De Novo算法分析與序列拼接

采集到的MS/MS碎片圖譜將被送入多個主流De Novo軟件（如PEAKS Studio、Novor、pNovo等）進行肽段序列預測。隨后結合人工審閱、結構模板對照及片段重疊關系，對抗體的輕鏈和重鏈進行全長序列拼接重建。CDR區、FR區、hinge區等關鍵功能域會被分別標注，特殊氨基酸如I/L（等質量異構體）也將人工確認。

5、翻譯后修飾識別與注釋（可選）

抗體蛋白常伴隨糖基化、氧化、脫酰胺等翻譯后修飾（PTMs），這些信息對表達系統選擇、功能活性分析等有重要意義。項目可同時進行修飾識別模塊分析，并在交付結果中提供修飾位點、修飾類型與可信度評分。

6、序列驗證與表達模板構建（可選）

完成序列解析后，若客戶有表達需求，百泰派克生物科技可進一步提供：

（1）cDNA序列反向翻譯

（2）表達載體構建與合成

（3）CHO/293細胞瞬轉表達驗證

（4）ELISA、Western Blot等活性檢測

從蛋白序列到功能抗體，一站式完成結構重建與功能復現，真正讓測序結果可驗證、可重組、可轉化。

三、百泰派克在單克隆抗體De Novo測序中的優勢

百泰派克生物科技將抗體De Novo測序標準化為一套嚴謹、高覆蓋、高還原度的服務體系。我們的技術優勢包括：

1、多酶協同體系優化：覆蓋率可達95%以上，CDR全區段識別率＞98%

2、雙平臺并行質譜分析：Orbitrap × timsTOF組合，提高數據通量與準確性

3、自研算法+人工復核機制：提升拼接準確率，杜絕輕鏈/重鏈錯配

4、修飾圖譜同步解讀：不僅得序列，更得修飾與結構功能信息

5、可選表達驗證服務：從蛋白到功能的真實閉環，結果可靠可復現

我們已成功為抗體藥企、科研院所、醫院課題組等多個客戶完成抗體重建、老抗體復現、抗原親和抗體篩選、功能驗證等項目，幫助其加快抗體工程進度或解決zhuānlì保護難題。單克隆抗體的結構解析，不應止步于序列獲取，而應延伸到功能復現、工程設計和產業轉化。De Novo測序作為連接實驗樣本與表達系統之間的橋梁，是目前wéiyī可實現“從蛋白直接還原全結構"的方法學。

百泰派克生物科技將持續通過高精度質譜平臺、優化的實驗流程和專家級數據分析，為您提供可信、高質量的抗體De Novo測序服務，助力您的抗體開發更加高效、透明、可

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術先進，填補技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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