如何使用ABPP開展小分子篩選與機制研究？檢測技術服務詳情介紹

在藥物發現與機制研究的早期階段，傳統的高通量篩選（HTS）方法雖然能從上萬種小分子中識別活性化合物，卻難以回答一個關鍵問題：“它是如何發揮作用的？"這正是活性位點標記的蛋白zhìzǔxué技術——活性基團標記的dànbáizhì譜分析（Activity-Based Protein Profiling, ABPP）的切入點。ABPP（Activity-Based Protein Profiling，活性基礎dànbáizhì譜分析）是一種基于化學探針的技術，廣泛用于篩選小分子藥物、識別作用靶標以及研究作用機制。其核心思想是利用活性位點特異性探針，對特定酶類或dànbáizhì家族進行活性標記，并結合蛋白zhìzǔxué方法進行分析。它不依賴于蛋白豐度，而是直接識別功能活躍狀態下的酶類蛋白，已成為新型小分子篩選、靶標鑒定和作用機制解析的強大工具。隨著共價抑制劑和dànbáizhì降解技術的興起，小分子藥物越來越強調“作用方式"的可控性。ABPP作為連接蛋白功能狀態與小分子識別機制的橋梁，正在。ABPP有望實現更高通量、更精細分辨率的功能蛋白圖譜繪制。未來，如何在結合化學遺傳學、AI輔助結構預測和單細胞質譜情況下，使用ABPP開展小分子篩選與機制研究是科研人員重新定義早期藥物篩選的重要課題。

一、ABP結構三要素

1、反應基團（Warhead）：與酶活性位點共價結合，常見如氟磷酰基、環氧基、磺酰氟等

2、連接臂（Linker）：調節探針空間構象，減少非特異性結合

3、可報告標簽（Tag）：用于后續富集（如shēngwùsù）或檢測（如熒光團、光敏交聯基團）

二、ABPP在小分子篩選中的應用

1、選擇合適的ABPP探針，探針結構一般包含三部分：

（1）反應性基團（Warhead）：特異性結合活性位點（如sīānsuān酯酶的氟磷酰基）。

（2）連接臂（Linker）：提供空間靈活性。

（3）標簽（Tag）：用于檢測（如熒光基團、shēngwùsù）或后續click反應（如炔基/疊氮基）。

2、設計競爭性ABPP實驗

將待篩選的小分子先與細胞裂解液或純化酶孵育。然后加入ABPP探針。如果小分子與酶的活性位點結合，會競爭性抑制探針標記，從而減少信號。

3、檢測與篩選

使用SDS-PAGE + 熒光成像、shēngwùsù標記+Western blot、或者MS質譜定量等方式檢測探針結合程度。比較加入小分子前后的差異，即可判斷其是否具有抑制作用。

三、工作流程簡述

1、探針處理樣本（細胞/組織裂解液或原位）

2、與靶標蛋白結合形成共價鍵

3、富集標記蛋白，進行質譜鑒定

四、ABPP在小分子篩選中的應用策略

1、競爭型ABPP（Competitive ABPP）：識別小分子作用靶標

在該策略中，小分子藥物先與體系孵育，再加入ABP。若小分子占據了酶的活性位點，則ABP的結合將被抑制，從而導致其在目標蛋白上的標記減少。通過定量質譜分析不同處理組之間的差異，可以：

（1） 篩選出與小分子競爭結合的酶類靶標

（2）解析小分子可能的作用機制與選擇性

2、反應譜（Reactivity Profiling）：發現新穎活性酶

ABPP可以用來繪制特定組織、細胞類型或病理狀態下的“酶活性圖譜"。這為靶標未知的小分子提供背景信息，有助于推測其可能的干預路徑。

3、用于酶類家族的選擇性優化

在共價抑制劑開發中，ABPP尤其適用于篩選具有家族成員差異性的抑制劑。

五、ABPP結合質譜的技術亮點

六、注意事項

1、探針的選擇要根據酶類（如sīānsuān酯酶、guāngānsuān酶、氧化還原酶）特異性設計。

2、小分子的可滲透性和穩定性對結果影響大。

3、注意非特異性結合和背景信號的控制。

在百泰派克生物科技，我們基于高分辨Orbitrap平臺，提供ABPP+TMT多biāojìdìng量、ABPP+SILAC穩定同位素標記等gāojí定量方案，助力客戶解析小分子與酶的jīngquè互作。已構建包括ABPP、DIA定量、磷酸化修飾分析在內的多元平臺解決方案。我們致力于幫助科研工作者在機制研究和靶點發現上少走彎路、快速驗證假設，為生命科學與創新藥物研發賦能。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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