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實驗材料

GenoSPYD過濾試劑盒（Blue DNA Compaion公司，法國）；

Precellys Evolution組織研磨器（Bertin公司，法國）；

MagSPYD自動化核酸提取平臺（Blue DNA Compaion公司，法國）;

MIC PCR儀；

GenoSPYD針對Enterococcus spp與E.coli的q-PCR定量試劑盒。

實驗程序

1.微生物樣品收集：每個樣品被0.45μm的濾膜過濾。之后將濾膜裝到GenoSPYD裂解管中，并加入1.5mlGenoSPYD細菌裂解緩沖液；

2.將裂解管放入到Precellys Evolution組織研磨器中，研磨程序為轉速6500rpm、3個循環、每個循環研磨45s、循環間歇30s；

3.RNA提取：包含RNA的溶菌產物使用GenoSPYD RNA提取試劑盒進行純化，可在MagSPYD自動化核酸提取平臺進行；

4.在MIC PCR儀上進行qRT-PCR的檢測。

實驗結果

圖1為對Enterococcus spp檢測的qRT-PCR放大曲線結果，

表1為水中腸球菌Enterococcus spp與大腸桿菌E.coli的LOQ(定量檢測限)和LOD（檢測下限）的結果。

結論

GenoSPYD自動化產品解決方法配合Precellys組織研磨器可以在3小時內快速檢測和定量活微生物樣本中一些特定如大腸桿菌、腸球菌、葡萄球菌、假單胞菌的RNA含量等。此方法的水質檢測指標可以達到100CFU，同時也被世界著名水務公司Suez Environment蘇伊士環境集團認證。

細菌樣本裂解程度直接決定了之后提取RNA的效率，Precellys Evolution研磨儀具備高性能、高效率、安全等特點，同時有冷卻裝置Cryolys Evolution，可使整個研磨過程的溫度準確維持在0-10℃，加配無RNA酶的研磨kit，輕松實現穩態RNA的提取，助力水源中細菌污染物的快速定量檢測，值得信賴！