多聚半乳糖醛酸酶（ploygalacturonase，PG）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一種細(xì)胞壁結(jié)合蛋白，可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，參與果膠的降解，使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)解體，導(dǎo)致果實(shí)軟化，與果實(shí)成熟、葉和花的脫落、病原物防御，細(xì)胞伸展發(fā)育以及木質(zhì)化有關(guān)，在植物抗病性和食品貯藏保鮮領(lǐng)域具有較高的研究價(jià)值。

測定原理：

多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS 試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在 540nm 有特征吸收峰，測定 540nm 處吸光值變化可計(jì)算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

多聚半乳糖醛酸酶試劑盒   果膠系列

試劑組成和配制：

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 ml 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

酶液提取：

1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。16000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴ 個(gè)）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后 16000g， 4℃離心 10min，取上清置于冰上待測。

3、培養(yǎng)液：直接檢測。

測定步驟：

酶活性計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml；y 為吸光值。

1. 按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH6.0 條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG 活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2. 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH6.0 條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG 活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×W÷V 樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3. 按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH6.0 條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG 活性（mg/h/ml）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷V 樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)

4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在 40℃，pH6.0 條件下，每 104 個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生 1mg 半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG 活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V 反總÷（V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量

V 反總：反應(yīng)總體積，0.5ml；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h。

注意事項(xiàng)：

煮沸樣本建議將樣本在沸水中煮沸 10 分鐘，以將酶che底滅活。

多聚半乳糖醛酸酶試劑盒   果膠系列