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96T人單核細胞趨化蛋白-4 (MCP-4) ELISA 檢測試劑盒使用說明書

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    2012年11月21日
關鍵詞
人單核細胞趨化蛋白-4 (MCP-4) ELISA 檢測試劑盒
上傳者
上海撫生科技發展有限公司
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資料簡介

人單核細胞趨化蛋白-4 (MCP-4) ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用     
 
試驗原理:
MCP-4試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知MCP-4濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將MCP-4和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中MCP-4的濃度呈比例關系。
 
試劑盒內容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存)96孔配置48孔配置配制
96/48人份酶標板1塊板(96T)半塊板(48T)即用型
塑料膜板蓋1塊半塊即用型
標準品:1600pg/ml1瓶(0.6ml)1瓶(0.3ml)按說明書進行稀稀
空白對照1瓶(1.0ml)1瓶(0.5ml)即用型
標準品稀釋緩沖液1瓶(4.0ml)1瓶(2.0ml)即用型
生物素標記的抗MCP-4抗體1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
親和鏈酶素-HRP1瓶(8.0ml)1瓶(4.0ml)即用型
洗滌緩沖液1瓶(20ml)1瓶(10ml)按說明書進行稀釋
底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
底物B1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
終止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型
標本稀釋液1瓶(12ml)1瓶(6.0ml)即用型
 
自備材料
1.蒸餾水。
2.加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.振蕩器及磁力攪拌器等。
 
安全性
1.避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
2.實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
3.不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。
人單核細胞趨化蛋白-4 (MCP-4) ELISA 檢測試劑盒
操作注意事項
1.試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
2.實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
3.不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
4.使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5.使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6.洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
7.底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
8.加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
9.按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
 
樣品收集、處理及保存方法
1、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5、保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
試劑的準備
1.標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行:
1600 pg/ml(6號標準品)原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
800 pg/ml(5號標準品)100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
400 pg/ml(4號標準品)100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
200 pg/ml(3號標準品)100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
100 pg/ml(2號標準品)100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
50 pg/ml(1號標準品)100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 pg/ml(空白對照)原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
 
2.洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。
 
 
操作步驟
1.使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。
2.根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5.每孔加入60ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。
8.取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
建議使用的實驗方案
標準品濃度(pg/ml)
A16001600樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
B800800樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
C400400樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
D200200樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
E100100樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
F5050樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
G00樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
H樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品樣品
人單核細胞趨化蛋白-4 (MCP-4) ELISA 檢測試劑盒
 
局限
6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。
 
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。
2. 特異性:不與其它細胞因子反應。
3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。
 
結 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
 
2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的MCP-4標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的MCP-4含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。
 
3、檢測值范圍:0-1600pg/ml
 
4、敏感度: 1.0 pg/ml
 
人血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒Human Plaet-Derived Growth Factor-BB,PDGF-BB ELISA試劑盒 
人CXC趨化因子配體16(CXCL16)ELISA試劑盒Human CXC-chemokine ligand 16,CXCL16 ELISA試劑盒
人CXC趨化因子受體3(CXCR3)ELISA試劑盒Human CXC-chemokine receptor 3,CXCR3 ELISA試劑盒
人原鈣黏素1(PCDH1)ELISA試劑盒 Human protocadherin 1,PCDH1 ELISA試劑盒
人白介素2受體(IL-2R)ELISA試劑盒 Human Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA試劑盒
人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)ELISA試劑盒Human cutaneous T cell-attracting chemokine,CTACK ELISA試劑盒
人胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)ELISA試劑盒Human Breast and kidney expressed chemokine,BRAK ELISA試劑盒
人B-淋巴細胞趨化因子1(BLC-1/CXCL13)ELISA試劑盒 Human B-Lymphocyte Chemoattractant 1,BLC-1 ELISA試劑盒
人結締組織活化肽Ⅲ(CTAPⅢ)ELISA試劑盒 Human connective tissue-activating peptide Ⅲ,CTAPⅢ ELISA試劑盒
人巨噬細胞集落刺激因子受體(M-CSFR)ELISA試劑盒Human Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptor,M-CSFR ELISA試劑盒
人免疫球蛋白A Fc段受體Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA試劑盒 Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin A,FcαRⅠ ELISA試劑盒
人免疫球蛋白E Fc段受體Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA試劑盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin E,FcεRⅡ ELISA試劑盒
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒 Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅢ ELISA試劑盒
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅡ ELISA試劑盒
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒 G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒 Human Receptor Ⅰ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅠ ELISA試劑盒
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)ELISA試劑盒 Human Receptor Ⅲ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅢ ELISA試劑盒
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅱ(FcγRⅡ/CD32)ELISA試劑盒 Human Receptor Ⅱ for the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅡ ELISA試劑盒
人免疫球蛋白G Fc段受體Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA試劑盒 Human ReceptorⅠfor the Fc region of immunoglobulin G,FcγRⅠ ELISA試劑盒 
人粒細胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒Human granulocyte chemotactic protein-2,GCP-2 ELISA試劑盒 
人ω干擾素(IFN-ω)ELISA試劑盒 Human Interferon ω,IFN-ω ELISA試劑盒
人糖基化依賴的細胞黏附分子(GlyCAM-1)ELISA試劑盒 Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1,GlyCAM-1 ELISA試劑盒
 

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