李向梅 韓京朋 蘇麗芳等

北京維德維康生物技術有限公司，北京  100095

摘要：為研制一種用于檢測牛奶中嘔吐毒素（deoxynivalenol，DON）殘留的快速檢測試紙條，試驗以人工合成抗原DON-OVA和羊抗鼠二抗為原料，包被硝酸纖維膜；以抗DON單克隆抗體為原料，制備金標抗體，并凍干保存于反應板微孔中，zui終制備出可用于檢測牛奶中DON殘留的膠體金快速檢測試紙條。結(jié)果顯示，該檢測試紙條檢測限為100 μg/L，重復性、特異性均較好，可用于檢測牛奶中DON殘留。

關鍵詞：嘔吐毒素；試紙條；牛奶

青貯飼料是指經(jīng)人工調(diào)劑的多汁青飼料，多用于反芻動物的冬春季節(jié)飼喂，對泌乳奶牛尤為重要(白曉燕等，2011)。但青貯飼料在儲存過程中易受到霉菌毒素的污染，奶牛進食受霉菌毒素污染的飼料后，不僅會影響奶牛的生產(chǎn)性能，且會引起牛奶中霉菌毒素的污染，影響原料奶的安全性(王星凌等，2010；王麗芳等，2011；李笑櫻等，2012)。嘔吐毒素(vomitoxin)，又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)，是一種無色針狀結(jié)晶，熔點為151～152 ℃，具有較強的熱抗力，121 ℃高壓加熱25 min僅有少量破壞(王金全，2011；林少青等，2009)。DON具有很強的毒性，可導致動物腸功能紊亂，引起嘔吐、腹瀉、腹痛等癥狀，且對免疫系統(tǒng)也有影響，并具有明顯的胚胎毒性和一定的致畸作用，還可能有遺傳毒性(金秀娟等，2010)。1998 年，在癌癥研究機構(gòu)公布的評價報告中，DON被列為3 類致癌物(封薇等，2012)。目前，針對牛奶中DON的檢測方法主要是儀器方法，免疫分析法還很少，且主要是進口產(chǎn)品(周思等，2011；鄭楠等，2012)。為此，本研究擬利用膠體金免疫層析法制備可檢測牛奶中DON殘留的快速檢測試紙條，用于基層進行大批量樣品的現(xiàn)場快速檢測，防止DON中毒事件的發(fā)生。

1  材料與方法

1.1  材料  DON、玉米赤霉烯酮、黃曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素A標準品及牛血清白蛋白（BSA）均購自Sigma公司；硝酸纖維素膜(NC膜)、樣品墊、PVC底板、吸水紙均購自上海金標生物科技有限公司；膠體金溶液、包被抗原（DON-OVA）、抗DON單克隆抗體均由北京維德維康生物技術有限公司自制。陰性牛奶樣品均為市售（經(jīng)ELISA試劑盒檢測確定為DON陰性牛奶）。

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