酵母菌

玻璃珠破菌緩沖液

玻璃珠拍打器

1.  培養并收集酵母菌細胞，在酵母消解酶緩沖液重懸菌體沉淀之前，測定壓緊細胞的體積，以下所有步驟均在4℃進行。

2.  用1體積的玻璃珠破菌緩沖液重懸細胞。

3.  用2體積的玻璃珠破菌緩沖液與細胞混合，加4體積冰冷的酸洗玻璃珠。

4a.  當壓緊的細胞休積＜10 ml，將細胞懸液轉移至合適大小的帶螺口的離心管中（懸液占離心管≤60%~70%的容積），于4℃以zui大速度下振蕩30~60 s，將管置于冰上放置1~2 min，重復3~5次，在顯微鏡下檢査破細胞的程度，繼續步驟5。

4b.  當壓緊的細胞體積＞10 ml，將細胞懸液轉移到合適大小的玻璃珠攪拌容器中（建議用導熱性能好的不銹鋼材料）并加玻璃珠破菌緩沖液至容器的邊緣，但加到容器中的緩沖液不超過1個細胞懸液的體積。裝好攪拌桿和螺蓋，確保將容器中所有空氣排盡（排除空氣以防止起泡和蛋白質變性這一點非常重要），高速攪拌60 s，冰上放置1~2 min，重復3~5次。

5.  沉淀玻璃珠，輕輕倒出上清，加入2~4體積的玻璃珠破菌緩沖液，顛倒管5~10次，待玻璃珠沉淀后輕輕倒出上清，合并上清液。

6.  合并的上清液于4℃，12 000 g 離心60 min，收集上清即為抽提液。長期貯存時，將其分成小份于液氮中快速冷凍，-80℃貯存。