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ELISA實驗攻略:樣本的收集與整理

來源:上海恒遠生物科技有限公司   2025年08月19日 09:57  

ELISA(酶聯免疫吸附試驗)是一種廣泛應用于生物學和醫學研究的免疫分析方法,其樣本收集與處理的質量直接影響實驗結果的準確性。以下是三類常見ELISA樣本的詳細收集與處理方法。


一、血清樣本處理
血清是ELISA實驗常用的樣本類型,其處理方法相對簡單但需要嚴格操作:

1.采集方法:
使用無熱原、無內毒素的試管或離心管采集血液樣本;
推薦使用干燥管(黃色)或促凝管(紅色)收集全血。

2.凝固處理:
將試管室溫放置自然凝固(視環境溫度10分鐘到2小時不等);
或4℃過夜使血清充分析出;
建議傾斜試管以擴大液面橫截面,促進血清分離。

3.離心分離:
2-8℃條件下以5000-6000轉/分鐘離心5分鐘左右;
也可采用2500-3500rpm離心5-10分鐘;
仔細收集上清液,避免吸取中間層細胞成分。

4.保存注意事項:
采集過程應避免溶血;
立即檢測或分裝保存于-20℃/-80℃;
避免反復凍融,保存期限通常為1-6個月。

二、血漿樣本處理
血漿樣本需要抗凝處理,與血清處理方法有所不同:

1.采集準備:
使用含抗凝劑(如EDTA、肝素或檸檬酸鈉)的采血管;
推薦使用2.0%EDTA作為抗凝劑。

2.采集與初步處理:
采集后立即輕柔顛倒混勻5-10次;
確保抗凝劑與血液充分混合。

3.離心分離:
4℃條件下700-1000×g離心10分鐘;
取上層淡黃色透明液體為血漿;
嚴格避免吸取中間白色干擾層(含白細胞和血小板)。

4.保存與注意事項:
可立即檢測或置于冰上短期保存;
長期保存建議-80℃,可儲存約1個月;
樣本應避免溶血或高血脂;
如有沉淀形成,使用前需再次離心。

三、細胞培養上清液處理
細胞培養上清液常用于檢測細胞分泌的可溶性因子:

1.收集方法:
用無菌管收集細胞培養上清液;
貼壁細胞需先用冷的PBS輕輕清洗;
懸浮細胞可直接離心收集。

2.離心處理:
1000×g離心20分鐘去除細胞碎片;
也可采用2000-3000轉/分離心20分鐘。

3.保存要求:
將上清液分裝保存于-20℃/-80℃;
避免反復凍融;
檢測前如有沉淀需再次離心。

四、通用注意事項

1.樣本質量要求:
所有樣本應澄清透明,無沉淀或懸浮物;
避免使用含NaN3的樣本(會抑制HRP活性導致假陰性);
組織樣本應按重量(g):體積(mL)=1:9比例加入勻漿介質處理。

2.保存與運輸:
-20℃保存樣本建議1-6個月內檢測;
4℃保存樣本應在一周內完成檢測;
運輸需使用耐低溫、密封性好的材料;
監控運輸溫度,必要時選擇專業溫控物流。

3.檢測前處理:
所有樣本檢測前應再次檢查澄清度;
如有沉淀或懸浮物需重新離心;
根據實驗需求進行適當稀釋。

正確的樣本收集與處理是ELISA實驗成功的關鍵第一步,遵循上述規范可顯著提高實驗結果的可靠性和重復性。不同樣本類型可能需要特定的處理方式,建議根據具體實驗目的和檢測指標選擇最合適的處理方法。


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