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超濾離心管操作指南：3大誤區(qū)毀樣本｜附分子截留/離心參數(shù)對(duì)照表
超濾回收率＜50%？本文詳解Millipore/Amicon超濾管選型技巧、離心程序、防堵膜策略，提供蛋白濃縮/緩沖液置換/脫鹽全方案！附轉(zhuǎn)速-分子量計(jì)算公式+堵膜急救方案。
一、超濾管選型黃金法則（立即避坑）
需求 | 膜材質(zhì) | 截留分子量 | 代表產(chǎn)品 |
蛋白濃縮 | 再生纖維素 | 10kDa | Amicon® Ultra-4 |
病毒純化 | PES | 100kDa | Millipore UFC9100 |
核酸回收 | 低吸附PVDF | 30kDa | Vivaspin® 20 |
內(nèi)毒素去除 | 超低吸附 | 3kDa | Amicon® Ultra-15 |
>??選錯(cuò)致命傷：截留分子量＞目標(biāo)物→樣本穿透丟失！
二、操作流程（4步提升回收率至＞90%）
Step1預(yù)處理（防膜失效關(guān)鍵！）
1.離心管冰上預(yù)冷
2.注入1ml預(yù)冷PBS
3.1500g×5min（活化膜孔，去除甘油/乙醇）
Step2樣本加載
參數(shù) | 標(biāo)準(zhǔn)值 | 避坑要點(diǎn) |
最大裝載量 | ＜80%管容積 | 防溢出污染 |
樣本粘度 | ＜50cP（過高需稀釋） | 粘度檢測(cè)方法：移液器吸打阻力 |
保留液體積 | ≥50μl（防干膜） | 定時(shí)觀察液面 |
Step3離心程序（轉(zhuǎn)速/時(shí)間公式）
?離心力計(jì)算公式：
RCF(g)=0.00001118×r×(RPM)2
（r=離心半徑cm）
分子量-離心參數(shù)表：
截留分子量 | 推薦離心力 | 時(shí)長(zhǎng) |
3kDa | 4000g | 20-30min |
10kDa | 3500g | 15-25min |
50kDa | 3000g | 10-15min |
>??防過熱技巧：4℃離心+每10min暫停降溫
Step4樣本回收
-正置法：直接吸取濃縮液（回收率80-90%）
-倒置法（高價(jià)值樣本）：
三、3大高頻問題急救方案
問題1：膜堵塞（流速驟降）
-處理步驟：
1.用0.1MNaOH反向沖洗10min
2.超純水沖洗3次
3.500g×5min低速離心疏通
問題2：回收率低
-根因排查：
現(xiàn)象 | 原因 | 對(duì)策 |
濾液渾濁 | 膜破裂 | 更換新管（勿超速） |
管壁掛液明顯 | 疏水吸附 | 預(yù)處理加 0.01% Tween-20 |
問題3：濃縮倍數(shù)不足
-科學(xué)濃縮比計(jì)算：
```
濃縮倍數(shù)=初始體積/終體積
（推薦≤10倍，防蛋白沉淀）
```
-高倍濃縮技巧：分次添加樣本（維持液面高度）
四、不同應(yīng)用場(chǎng)景參數(shù)優(yōu)化
實(shí)驗(yàn)目標(biāo) | 關(guān)鍵參數(shù)調(diào)整 | 回收率 |
蛋白濃縮 | 4℃ + 3500g × 15min | 92% |
緩沖液置換 | 預(yù)裝新緩沖液 ×3次 | ＞99% |
脫鹽 | 超純水稀釋 ×5次 | ＞98% |
外泌體純化 | 100kDa + 3000g ×30min | 80% |
五、產(chǎn)品推薦
密理博millipore超濾離心管——天津益元利康生物科技有限公司，歡迎咨詢。
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