高效質粒DNA提取：試劑盒原理與操作步驟詳解 -賽默飛

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賽默飛世爾科技提供廣泛的質粒 DNA 提取產品，旨在以您需要的純度和規模分離質粒 DNA。我們擁有多種高性能且經濟高效的質粒純化技術供選擇，這些技術旨在幫助您克服常見的質粒制備問題，如低回收率和殘留雜質。了解如何使用我們的試劑盒和質粒分離實驗方案手動純化質粒 DNA。 

賽默飛提供質粒DNA提取和分離產品，請訪問獲取產品最新信息。 

什么是質粒純化？ 

質粒純化又稱為質粒分離或質粒 DNA 分離，是指從細菌細胞中提取和純化質粒 DNA，使科研人員獲得高度濃縮和純化的質粒形式，以便進一步分析和實驗。質粒純化的關鍵步驟通常包括細菌細胞裂解、去除細胞碎片、結合質粒 DNA、清洗、洗脫質粒 DNA 以及根據下游應用的可選附加步驟。 

為什么質粒純化如此重要？ 

質粒純化至關重要，因為質粒DNA（pDNA）是基因工程中的基礎工具，支持克隆、基因表達研究和治療開發等應用。高質量的質粒DNA對于確保關鍵下游項目（如疫苗生產、細胞和基因治療）的準確性和可靠性至關重要，有助于推動科學突破。 

傳統手動質粒純化的關鍵步驟通常包括： 

· 收集細菌：離心20–30分鐘 

· 重懸、裂解、中和：在實驗臺上操作15–20分鐘 

· 澄清裂解液：使用離心機、注射器或真空裝置5–10分鐘；“去除內毒素” 

· 結合、清洗、洗脫、沉淀：使用滴液技術和/或離心45–60分鐘 

· 重懸于溶液中：在實驗臺上操作10分鐘 

總預計時間：95–130分鐘 

理解質粒純化 

質粒純化有兩個主要考慮因素：制備規模和純度等級。這兩者直接影響到下游應用的成功與否。從小規模研究到大規模治療生產，這些因素——以及適當的純度/內毒素水平——有助于確保獲得適量的質粒DNA，從而實現可靠且可重復的預期結果。 

質粒DNA分離的制備規模 

質粒有不同的大小，包括小型（1–10 kb）、中型（10–50 kb）和大型（>50 kb）。小型質粒非常適合基礎克隆和基因表達研究，中型質粒用于更復雜的基因工程任務，而大型質粒則適用于創建基因組文庫和大規模基因項目。了解適當的培養基和質粒大小對于在基因研究和生物技術中取得成功至關重要。 

質粒生長培養基，如LB肉湯、Terrific Broth (TB)、SOC培養基和2xYT，對于培養含有質粒的細菌細胞至關重要。這些營養豐富的培養基可以提高質粒產量，優化細菌生長條件，并提高轉化效率，使其成為各種分子生物學實驗的多功能工具。 

質粒 DNA 分離的制備量 

表 1. 從小量制備（1–5 mL）到宏量制備（2.5–5 L）的每種質粒制備規模所需的過夜培養菌液體積以及質粒 DNA（pDNA）的大致產量。 

質粒 DNA 分離純度等級和內毒素水平 

當涉及到質粒分離時，科研人員可以根據他們的具體需求進行一系列選擇。分子級質粒分離技術提供了速度和成本效益，使其非常適合克隆、核酸標記、PCR 和測序等穩健應用，其中高純度水平并非必需。另一方面，轉染級質粒純化技術專為需要更高純度和更高產量的應用而設計，例如標準細胞系的轉染和體外轉錄。轉染級質粒 DNA 也可用于分子級應用。對于最敏感的應用，如轉染敏感細胞系或體內研究，推薦采用高級轉染級質粒分離技術。該技術有助于確保純度，也可用于所有分子和轉染級應用。 

對質粒 DNA 進行穩健的純化，以滿足下游應用所需的產量和純度，是任何蛋白表達工作流程的關鍵步驟。了解如何獲得轉染級質粒并將其與 Gibco ExpiCHO 和 Expi293 瞬時哺乳動物表達系統一起使用。 

自動化質粒純化解決方案 

自動化質粒純化?是一種利用機器人技術簡化流程的先進技術。賽默飛世爾科技提供自動化質粒純化解決方案，可實現高通量且無需離心的轉染級質粒 DNA 純化。這些解決方案通過精確控制純化步驟和試劑體積，最大限度地減少了人為錯誤，并有助于確保重現性。對于小規模應用，專門的磁珠純化試劑盒可用于在整合液體處理能力的 KingFisher 平臺上高效分離質粒 DNA。同樣，對于大規模自動化而言， KingFisher PlasmiPro 全自動大規模質粒提取儀使用預分裝卡盒，實現無需手動操作的純化體驗。通過該過程獲得的純化質粒 DNA 可用于一系列下游應用，包括轉染、載體制備、酶修飾、克隆、測序、體外?轉錄 / 翻譯等。 

使用KingFisher PlasmidPro實現質粒純化自動化 

了解如何使用KingFisher PlasmidPro 全自動大規模質粒提取儀實現您的質粒DNA分離自動化。這是KingFisher儀器系列中的最新成員。 

質粒DNA純化試劑盒 

在質粒純化過程中，裂解細菌會釋放大量內毒素，這些內毒素可能對細胞生長、細胞活性、轉染效率、蛋白質表達產生負面影響，甚至模擬人類敗血癥。賽默飛世爾科技提供的純化試劑盒，可滿足不同純度等級的質粒DNA（pDNA）需求，包括轉染級、高級轉染級和分子級試劑盒。 

賽默飛世爾科技的端到端解決方案。本工作流程展示了蛋白質表達的端到端解決方案，以及質粒純化如何與整個過程相關聯。賽默飛為過程的每一步都提供了解決方案。質粒設計可以從Gene Art質粒服務開始，而質粒生產則可以使用克隆和載體插入片段驗證、轉化和培養生長等技術。質粒純化可以使用KingFisher PlasmidPro 全自動大規模質粒提取儀實現自動化，使用MagMAX Pro HT NoSpin 質粒小量制備試劑盒和KingFisher 純化系統，或者 PureLink和Expi試劑盒手動進行。該工作流程可以通過克隆、哺乳動物細胞表達、轉染和使用Gibco ExpiCHO等系統的蛋白質表達來完成。 

轉染級質粒 DNA 純化試劑盒 

轉染級質粒分離試劑盒專為需要從細菌培養物中提取具有極低內毒素水平的質粒 DNA（pDNA）的科研人員設計。在質粒純化過程中，大量內毒素從裂解細菌中釋放出來，這會對細胞生長、細胞活力、轉染效率、蛋白質表達產生負面影響，甚至模擬膿毒癥。為了解決這些問題，我們專為低內毒素質粒 DNA 分離而設計的試劑盒能夠仔細去除這些內毒素，有助于確保分離的質粒 DNA 的完整性。這些試劑盒提供了一種快速簡便的質粒純化方法，有助于為敏感的下游應用提供高純度和高產量。無論您的制備規模是小還是大，我們的轉染級質粒分離試劑盒都是根據您的特定需求量身定制的，使您能夠獲得可靠且可重復的結果。? 

高級轉染級質粒 DNA 純化試劑盒 

對于需要更高水平去除內毒素的科研人員，我們提供高級轉染級質粒分離試劑盒。這些試劑盒超越了標準轉染級試劑盒，提供了更高的內毒素去除水平，有助于確保分離的質粒 DNA 的純度。使用我們高級轉染級質粒分離試劑盒，您可以放心地執行要求質量 pDNA 的下游應用。這些試劑盒非常適合從事關鍵實驗的研究人員，在這些實驗中，即使是微量內毒素也會對其結果產生重大影響。使用我們的高級轉染級質粒分離試劑盒可以幫助消除與內毒素相關的風險，獲取純質粒 DNA，用于您的科學研究。 

分子級質粒 DNA 純化試劑盒 

為實現快速、簡單和可靠的質粒純化，我們的 Invitrogen PureLink 和 GeneJET 分子級質粒 DNA（pDNA）分離試劑盒可生產與一系列標準分子生物學應用兼容的即用型純質粒。分子級試劑盒適用于細菌和酵母細胞的轉化；然而，由于存在內毒素，可能不太適合敏感哺乳動物細胞的轉染。對于轉染應用，請參見上述轉染級質粒純化試劑盒。 

用于質粒分離的其他緩沖液： 

· PureLink HiPure BAC 緩沖液試劑盒 

· PureLink Expi 無內毒素緩沖液套裝 

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