端粒由高度重復的 DNA 序列(如人類的(TTAGGG)n)與特定蛋白復合體構成,它為染色體末端提供了穩固的保護屏障,避免其在細胞分裂過程中受到侵蝕與降解。
研究表明,端粒長度與衰老、癌癥、神經退行性疾病等多種疾病存在著千絲萬縷的聯系。從胎兒到老年人,人體細胞的端粒長度隨著年齡增長而呈現縮短趨勢,它就像一個伴隨著生命歷程的隱形時鐘,記錄著細胞的繁衍與衰老軌跡,全血端粒長度甚至可作為其他人體組織端粒長度的替代指標,為評估個體健康狀況和疾病風險提供了重要依據。
端粒長度檢測的方法有哪些
TRF法檢測端粒長度 :科研和臨床金標準
TRF分析也稱作端粒的Southern印跡法,是應用針對端粒重復序列的探針來檢測限制性酶切后所保留的端粒的方法。
限制性酶會將基因組DNA消化為短的片段, 留下大量完好的端粒,即所謂的端粒限制性片段。
以凝膠電泳分離基因組片段 ,通過放射性探針 (CCCTAA)。
QPCR法檢測端粒長度:操作簡便,用時短,適用于批量檢測
端粒為染色體末端GGGATT 6堿基重復序列 ,設計PCR引物十分困難(二聚體不可避免),也無法設計Taqman探針。
2002年, Richard通過引物中引入突變 ,減少二聚體的產生,成功利用SYBR Green染料法測定端粒的相對長度。
翼和總體設計方案:雙重熒光QPCR
? 利用SYBR green 染料檢測端粒擴增產物
? 利用VIC熒光標記的Uniprimer(發夾型)引物,檢測內參基因擴增產物
優點:擴增效率高,體系穩定性強,消除孔間差異,減小誤差。
端粒擴增產物量遠高于內參基因的擴增產物,因此內參基因擴增產物中SYBR green 參入產生的熒光可忽略。
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