D-蟲熒光素(D-Luciferin)是螢火蟲熒光素酶底物,其量子效率為0.88,是Luminol的20倍。反應原理:首先,在鎂離子存在下熒光素酶使熒光素與ATP反應,接著它被氧化形成二氧雜環丁烷結構并發出黃綠色的光。Luciferin-luciferase發光用于ATP監控以測定細胞活力以及細菌計數。它還用于報告基因檢測。可與小動物活體成像系統配套使用,用于標記LUC基因后的體內活體熒光檢測。
應用:
(1) 體外分析
(2) 活體成像分析
(3) 高靈敏度ATP分析
使用方法:
1. 活體成像分析方法
(1) 用DPBS(w/o Mg2+ 、Ca2+ )配置D-Luciferin工作液(15mg/mL,超聲助溶)* ,0.2 μm濾膜無菌過濾。
(2) 注射量:10μL/g的體重,如10g 重小鼠,注射100μL 工作液(1.5 mg D-Luciferin)。
(3) 腹腔注射10~15分鐘后,上機進行圖像分析。
2. 體外分析方法
(1) 用無菌水配置200× 的D-Luciferin儲備液(30mg/mL,超聲助溶)*,立即使用,或-20℃保存。
(2) 用預熱好的充分培養基1∶200稀釋D-Luciferin儲備液,配置工作液(150μg/mL)。
(3) 去除培養細胞的培養基。
(4) 進行圖像分析前,向細胞中添加1× 的D-Luciferin工作液,進行圖像分析**。
(5):溶解D-Luciferin時要充分。
(6):在圖像分析前,將細胞進行37℃的短時間培養可以增加信號強度。
相關產品:
D-蟲熒光素游離酸(D-Luciferin, free acid)、D-蟲熒光素鉀鹽(D-Luciferin, potassium salt)和D-蟲熒光素鈉鹽(D-Luciferin, sodium salt),鉀鹽、鈉鹽的形式是通用的,因為它們都易溶于水。鉀鹽也是活體動物檢測使用的主要形式。它們的激發和發射波長分別為328nm和533nm。
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