一、一抗4℃孵育安全孵育窗口：4-24小時

*數據來源：Nature Methods (2021) 對比實驗，樣本為Hela細胞裂解液

二、一抗4℃孵育超時風險紅線（＞24小時）

?? 72小時極限測試結果

注： 含0.02%疊氮鈉時失活率降至18%

三、一抗4℃孵育科學優化方案

1. 低豐度蛋白解決方案

增強劑聯用：

添加 0.5% Casein → 信號提升2.1倍（縮短至12小時）

使用 Realtime HRP底物 → 檢測限降低至0.1pg（避免過夜）

2. 超長孵育必做防護

1. 密封防干：膜置于密封袋+滴加緩沖液覆蓋

邊緣用玻棒壓合（參考Bio-Rad密封法）

2. 抑菌處理： 含0.02%疊氮鈉（注意：HRP酶系統禁用！）

3. 低溫恒定： 冷房（4℃）優于冰箱 → 避免溫度波動

四、一抗4℃孵育替代方案推薦

操作口訣

“ 4度過夜最穩妥，24小時是紅線；
低豐蛋白加Casein，超長孵育要密封！ ”

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