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【Biorbyt實驗】斑點印跡 Dot Blotting

來源：武漢博歐特生物科技有限公司 2025年03月27日 15:02

【Biorbyt實驗】斑點印跡 Dot Blotting

原創 biorbyt 英國biorbyt

將各種生物大分子從凝膠轉移到一種固定基質上的過程稱為“印跡技術”（Blotting）。生物大分子印跡技術發展極為迅速，已廣泛應用于DNA、RNA和蛋白質的檢測。

通常人們將DNA印跡技術稱為Southern Blotting;將RNA印跡技術稱為Northern Blotting;

將蛋白質印跡技術稱為Western Blotting，將不經凝膠的印跡技術稱為斑點印跡（Dot Blotting)。

蛋白質印跡技術（Western Blotting）從發明以來已有40余年，至今為止依然是“*傳統”且“應用*廣”的一種蛋白質表達水平檢測技術。但是其實驗步驟復雜，一次性處理樣品能力有限，所得結果只能進行半定量分析，因而限制了其在高通量樣本蛋白質表達水平檢測中的應用。

相比于蛋白質印跡技術，斑點印跡分析法(Dot Blotting)通過簡化實驗流程，可以完成高通量樣本蛋白質表達水平的檢測，但是實驗結果依然只能以“半定量”形式體現。

在斑點印跡中，要檢測到的生物分子不是首先通過電泳分離出來的，而是將含有被檢測分子的混合物直接點在膜上，烘烤固定。然后用核苷酸探針或抗體雜交后檢測。這種方法耗時短，可做半定量分析。一張膜上可同時檢測多個樣品。為使點樣準確方便，市售有多種多管吸印儀。

斑點印跡 Dot Blotting一般操作步驟：

1、點樣

取硝酸纖維素膜1張，裁成需要的長度，并在其上畫長寬為1cm×1cm正方形小格。將不同濃度的標準品稀釋液、樣品、陰性對照、陽性對照，各取2ul點在膜上正方形小格里。

2、風干

將點樣后的膜風干，或放在37℃恒溫培養箱中烘30分鐘。

3、封閉

將膜置于封閉液（5%脫脂奶粉溶于超純水中）室溫封閉1小時（也可4℃過夜封閉)。

4、一抗孵育

封閉結束棄去封閉液后，加入稀釋好的一抗工作液，室溫震蕩孵育1小時（或4℃過夜）。

5、洗滌

去除一抗工作液，將硝酸纖維素膜用PBST或TBST緩沖液充分淋洗兩次,每次洗后都盡量棄去溶液。然后再用PBST或TBST緩沖液震蕩洗滌3 次,每次5分鐘。

6、二抗孵育

洗滌完成后，加入稀釋好的二抗工作液，室溫震蕩孵育1小時。

7、洗滌

去除二抗工作液，將硝酸纖維素膜用PBST或TBST緩沖液充分淋洗兩次,每次洗后都盡量棄去溶液。然后再用PBST或TBST緩沖液震蕩洗滌3 次,每次5分鐘。

8、曝光

取出硝酸纖維素膜，吸水紙略吸去膜上多余溶液后，加入適量的發光檢測工作液（吸取溶液A和溶液B按1: 1混勻），使膜上均勻覆蓋，室溫孵育1-2分鐘。

抖去多余的顯色劑，用保鮮膜將硝酸纖維素膜覆蓋，平整無氣泡，并放在曝光夾上，然后取適當大小的膠片覆蓋在薄膜上，關夾曝光。

根據樣品及標準品的亮度，確定大致曝光時間。一般情況下，如果樣品亮度肉眼可見且較強，那么初次曝光時間應較短，一般選3-5秒:如果樣品亮度肉眼不可見，則初次曝光時間應略長一些，一般選擇1分鐘。

9、顯影

曝光后,取出膠片浸于顯影液中,在紅光下觀察，直到膠片上的樣品點不再變化為止(約1.5分鐘)，取出膠片在水中涮洗一下(此步驟避免顯影液與定影液混合,降低定影液使用效率),再放入定影液中，當膠片本底呈現藍色透明后，即可取出膠片進行流水沖洗，洗凈后晾干即可。

Biorbyt團隊可以為您提供斑點印跡實驗所需的試劑，包括超過2800多種的抗體和400多種蛋白，用于支持您的研究。請說出您的需求，我們一定努力超出您的期望！

BIORBYT簡介

英國biorbyt 成立于2011年，總部位于英國劍橋，系*界*先地位的高品質生命科學試劑供應商，致力于為生命科學領域的科研人員提供高品質的產品和專業的技術服務。Biorbyt 專注于生命科學和生物技術領域研究，主要產品有抗體、小分子、ELISA試劑盒、蛋白等。Biorbyt 與世界*名高校、研究所、制藥公司、生物科技公司和醫院等客戶建立了長期穩定的合作關系，產品銷往*球。Biorby 已通過國際標準化組織 (ISO 9001)認證，并且于2021年榮獲了“英國*王企業獎”。

Biorbyt Ltd. was established in 2011, based in Cambridge, UK. We are committed to providing high quality products and professional technical services to researchers in the life science sector. Biorbyt is a leading, global, high-quality reagent supplier specialising in life science and biotechnology research. The main products offered by Biorbyt include antibodies, small molecules, ELISA kits, and proteins. Supplying on a global basis, Biorbyt has established long-term, stable, co-operative relationships with world-renowned universities,research institutes, pharmaceutical & biotechnology companies, as well as hospitals. Biorbyt have received ISO 9001 certifications,and won the "Queen's Awards for Enterprise" in 2021

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