雞網狀內皮組織增殖病病毒抗原（REV- Ag）酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
                                                                                                                                          96T 
 
使用目的：
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關液體樣本中網狀內皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）表達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中雞網狀內皮組織增殖病病毒抗原（REV -Ag）表達。
用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中網狀內皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與 HRP 標記的抗體結合，形
成抗體-抗原-抗體復合物，經過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉
化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD
值），與CUTOFF 值相比較，從而判定標本中雞網狀內皮組織增殖病病毒抗原（REV -Ag）
的存在與否。
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  陽性對照  0.5ml×1 瓶
3  酶標包被板  12孔×8 條  9  陰性對照  0.5 ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11   封板膜  2 張    
6  顯色劑 B 液  6ml×1/ 瓶  12  密封袋  1 個
標本要求  
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟
1.   編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照 2 孔、陽性對照2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）
 
 
2.   加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50µl 。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40µl ，然后再加待測樣品 10µl 。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不
觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
3.   溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5 次，拍干。
6.   加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。  
7.   溫育：操作同 3。
8.   洗滌：操作同 5。
9.   顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止：每孔加終止液50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.  測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。  測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。
 
 
操作程序總結：
 
 
 
 
計算和結果判定：
    試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00;  陰性對照平均值≤0.10 
    臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
    陰性判定：樣品OD 值<  臨界值（CUT  OFF）者為網狀內皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）陰性
    陽性判定：樣品OD 值≥  臨界值（CUT  OFF）者為網狀內皮組織增殖病病毒抗原
（REV-Ag）陽性
。  
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。
2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存。
6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm 
7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。注意安全。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 個月