MAKLER 精子計數板使用說明書 

一、描述：

Makler 精子計數板（腔室）是一種方便精子計數的設備，用于快速的精子計數、活動性和形態學評價，可使用未稀釋的樣品。

計數板包括兩個部分：

1. 下面的主要部分有一個金屬基底（A）和兩個把手（H）。在基底的中心有一個光學平玻璃制的平盤（D），樣品放置其上。在平盤周圍有四個針（P）。他們的比平盤高10微米。

2. 上面部分是覆蓋玻璃（C）被一個金屬環環繞。在他的下表面中心有一個 1 mm平方的格子，被分成100個方格，每個是0.1 mm X 0.1mm 。當覆蓋玻璃放置在四個針上時，在一行上的10個方格包圍的空間就是一毫升的百萬分之一。因此，在10個方格里的精子頭數量代表著他們以 百萬/mL 為單位的濃度。

二、腔室的準備：

在把樣品放在平盤上之前，確保相對表面*清潔且無塵，因為大多數顆粒的尺寸大于玻璃間的狹小空間。為了此目的，用鏡頭紙擦兩個表面。清潔度可以通過把覆蓋玻璃放置到四個針上，觀察四個接觸點彩色邊紋（Newton現象）來檢查。對著熒光燈可以看到的效果。

三、精液分析的方法：

充分混合樣品，注意避免產生氣泡。通過木棒或移液器的幫助，在平盤中心區域放置一小滴。用手指拿起覆蓋玻璃黑色點的相反面，并立即放在四根針上。輕柔按下，再次觀察彩色邊紋。液滴會在平盤的整個區域擴散成厚度10微米的薄層。

只要針沒有被淹沒，多余的不會影響正常的分析。一旦覆蓋玻璃就位，避免觸摸、抬起以及再次覆蓋。因為這會改變腔室內精子的平均分布。用把手拿起腔室并放置在顯微鏡平臺上。可能需要用腔室夾頭來進行固定。

四、特別注意事項

1，不要對此腔室使用40X 物鏡。這樣蓋玻片在聚焦時會被破壞。

2，即使使用合適的20X 物鏡，也要小心不要壓到覆蓋玻璃上。 一般當物鏡末端距離表面1mm的時候，圖像是清晰的。如果因為不正確的使用顯微鏡導致覆蓋玻璃損壞，我們不會負責。

3，推薦使用20X 物鏡和10X 目鏡。不推薦使用10X 物鏡，因為精子看起來會太小，除非用20X 目鏡。

五、精子計數：

如果精子太密集和活動，他們首先需要被固定。這很容易做到，通過把樣品一部分轉移到另一個測試管。然后測試管插入50℃-60℃熱水中，大約5分鐘。一滴充分混合的，預熱的樣品放置在腔室上并蓋上覆蓋玻璃。在格子的方格里精子頭被計數，與血液學中計數血細胞的方法一樣。              

在此精子的數量是zui重要的，在連續一列10個方格里對其計數。數量代表了以 百萬每毫升為單位的濃度。在其他一列或兩列里重復此操作，以測定平均值。可以選擇用其他2或3滴樣品進行計數以提高計數的可靠性。在精子缺乏癥樣品中，推薦在整個格子區域計數。

在精子聚焦之后，移動顯微鏡平臺把各自定位在視野中心。然后，調節腔室以使格子線處于水平和垂直位置。

在此搜索期間你可能會觀察到：

A）精子分別是否均勻？如果不是，樣品沒有混合好。

B） 是否所有精子都在一個聚焦平面，沒有模糊？如果不是，可能表面沒有清潔或兩個表面之間有大的顆粒。

任意情況，都要從開始重復。

六、活動性評價：

推薦在樣品準備好3-5分鐘之內進行活動性評價，以避免從周邊移動過來的精子的干擾。計數9或16格內所有不能動的精子。然后計數相同區域內能動的精子且評估移動等級+1到+4. 在格子的另一個區域重復此過程，以及另外3到4滴樣品并計算平均值。

這樣的評估比原始載玻片上的要很多，因為那里精子被蓋玻片壓縮且活動性被損害。Makler精子計數板提供了標準條件，對所有分析樣品精子都可以在一個光滑的水平面自由移動。

七、形態學：

快速精子形態學評價可以從一個濕的未染色的樣品進行，其包含固定的精子。推薦使用一個相差顯微鏡。在格子的一個特定區域計數所有正常和不正常精子，且從其他樣品重復此過程以達到總計數200。顯然，精子缺乏癥樣品掃描的精子數可以更低。腔室不適合染色的，干的樣品進行形態學測定。

八、特殊情況：

氣泡：格子區域如果出現氣泡，推薦換一滴樣品，除非氣泡非常小，不影響分析。

大的灰塵顆粒，纖維等，也會通過改變空間大小來影響計數，也應該更換一滴樣品。如果樣品沒有混合*，高度粘稠，或腔室有顆?；蚧覊m；在同一樣品不同滴之間計數會出現較大差別。

凝聚：在腔室里有時周圍的精子會聚集，如果在計數之前過去了太久。這種情況下，更換此滴樣品為適當混合的新樣品。在個別情況下，在格子區域內會出現膠狀聚集，此時應更換樣品。

結晶：樣品時間過長可能包含晶體，可能不會影響計數，但使計數更困難。有時候，這些晶體太大，可能會損壞表面區域。因此，分析包含晶體的樣品時需特別注意。

九、為了重復使用的清洗和準備：

不要用自來水淋洗或浸泡腔室。把刷子蘸水或非腐蝕性殺菌溶液，并擦玻璃的兩個面。然后，擠壓刷子擦掉剩下的水。zui后用無毛鏡頭紙擦干表面，盡量避免觸摸針的。腔室現在可以重復使用了。

一般來說，一旦檢查固定，不需要改變聚焦。無需提高物鏡，簡單的把腔室滑進滑出即可。

十、附 件：

ü  清潔刷

ü  無毛鏡頭紙

ü  腔室夾頭——在精子分析期間此設備應該被放置在顯微鏡平臺上。緊緊夾住腔室使之可以在平臺上平滑移位。當精子分析結束，握住夾頭把腔室滑出。要進行新的精子分析，再次把腔室滑進夾頭。

ü  英文說明書