血清淀粉酶（AMY）活性檢測試劑盒 (碘-淀粉比色法)

（微量法）

產品貨號：BA1930

產品規(guī)格：100T/48S

產品簡介：

血清淀粉酶( Serum amylase，AMY) 屬于α-淀粉酶，以無規(guī)則方式水解多糖分子內部的α-1,4糖苷鍵，生成寡聚糖、麥芽糖和葡萄糖的混合物。AMY主要由唾液腺和胰腺分泌，另外近端十二指腸、肺、子宮、泌乳期的乳腺等器官也有少量分泌。

AMY催化淀粉分子中的α-1,4糖苷鍵水解，產生葡萄糖、麥芽糖以及糊精等，碘可以與未被水解的淀粉結合， 生成在570nm下有特征吸收峰的復合物，其深淺可計算出淀粉酶的活力單位。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

產品組成：

溶液的配制：

1. 試劑一：臨用前加入12.5mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，期間不斷攪拌粉劑至溶解；用不完的試劑2-8℃保存1個月。

2. 試劑三的配制：將試劑三A倒入試劑三B中，用蒸餾水定容至10mL，2-8℃避光保存一個月。

3. 標準品：10mg淀粉標準品。臨用前加10mL試劑二，置于常溫水中并加熱至煮沸，配成1mg/mL淀粉標準液。用不完的試劑2-8℃保存1個月。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱、臺式離心機、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取 

取40μL血清和160μL蒸餾水混合（即將血清稀釋5倍），分為2管100μL分別作為測定管和對照管。若實驗后所測數(shù)值偏大或者偏小，可以調整稀釋比例（比如數(shù)值偏小可以將80μL血清和120μL蒸餾水混合即將血清稀釋2.5倍）

二、測定步驟和加樣表

1. 分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節(jié)波長至570nm，蒸餾水調零。

2. 將淀粉標準液用蒸餾水稀釋為0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL的標準溶液。

3. 按操作表依次加入各試劑：

混勻后吸取200μL于微量玻璃比色皿或者96孔板中，于15min內讀取測定管、對照管、空白管1、標準管、空白管2在570nm下的吸光度，分別記為A測定、A對照、A空白1、A標準和A空白2，計算ΔA測定=（A空白1-A空白2）-（A測定-A對照），ΔA標準=A標準-A空白2。

三、AMY活性計算 

1. 標準曲線的繪制：

以ΔA標準為y軸，以標準溶液濃度為x軸，繪制標準曲線，得到方程y=kx+b。將ΔA測定帶入方程得到x （mg/mL）。  

2. 按照血清體積計算：

單位定義：每mL血清每分鐘消耗1mg淀粉定義為1個酶活性單位。

AMY活性 (U/mL)= x×V樣÷V樣÷T×F =0.1×x×F

V樣：加入反應體系中樣本體積，0.1mL；T：反應時間，10min；F：稀釋倍數(shù)。

注意事項：

1. ΔA測定大于1.5時，可以對樣本進行適當稀釋后測定。

2. 反應完成后需在15min內測定吸光度。