ELISA試劑盒實驗常見問題及解決方法

來源：上海欣維宇生物科技有限公司 2023年07月26日 11:26

　　對于ELISA試劑盒實驗新手來說，實驗中遇到的一些棘手的問題便無從下手，為大家列出了ELISA試劑盒實驗中一些常見的問題以及解決方法，希望對您有所幫助：

　　問題序號可能原因解決方法顯色淡，靈敏度偏低。

　　（1）試劑盒未充分平衡試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）

　　（2）樣品不適合做ELISA檢測樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測或者需要優(yōu)化檢測的條件（例如稀釋液的成分）

　　（3）酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時過分干燥防止板過于干燥

　　（4）包被抗體遭到破壞操作溫和，移液槍不能碰到孔底

　　（5）樣本和抗體孵育條件不合適按照說明書條件，建議孵育過程中全程振蕩孵育。

　　（6）洗滌浸泡時間過長按照說明書操作。勿人為增加浸泡時間；

　　（7）偶聯(lián)HRP試劑污染棄去試劑，重新配置

　　（8）錯誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑棄去試劑，重新配置

　　（9）TMB底物孵育時間過短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時間確定合適的孵育時間：人為判定-最高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)深藍色；S4-5有淡藍色；機器判定620 nm波長下測定OD值達到0.6-0.65

　　（10）樣本濃度過高或存在基質(zhì)效應(yīng)建議做不同稀釋倍數(shù)，確認樣本最合適的稀釋倍數(shù)。

　　(11)酶標(biāo)儀濾光片設(shè)置有問題或者波長選擇不對確認儀器設(shè)置及選擇正確的波長檢測。

　　（12）酶標(biāo)板不適合做ELISA不能使用細胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA專用高吸附力板子。背景深，全部呈有色（通常的Elisa背景值OD<0.2）

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