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高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。儲液器中的流動相被高壓泵打入檢測系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內，由于樣本溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的“吸附-解吸”的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣本濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式輸出檢測結果。
高效液相色譜儀出現的故障是有哪些因素引起的
(一)保留時間變化
1.柱溫變化 柱恒溫，必要時需配置恒溫箱
2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱
3.緩沖液容量不夠用 》25mmol/L的緩沖液
4.柱污染 每天沖洗柱
5.柱內條件變化 穩定進樣條件,調節流動相
6.柱快達到壽命 采用保護柱
(二)保留時間縮短
1.流速增加 檢查泵,重新設定流速
2.樣品超載 降低樣品量
3.鍵合相流失 流動相pH值保持在3~7.5，檢查柱的方向
4.流動相組成變化 防止流動相蒸發或沉淀
5.溫度增加 柱恒溫
(三)保留時間延長
1.流速下降 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡
2.硅膠柱上活性點變化 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿質鈍化柱
3.鍵合相流失
4.流動相組成變化
5.溫度降低
(四) 出現肩峰或分叉
1.樣品體積過大 用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15%
2.樣品溶劑過強 采用較弱的樣品溶劑
3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件
4.柱內燒結不銹鋼失效 更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品
5.進樣器損壞 更換進樣器轉子
(五)鬼峰
1.進樣閥殘余峰 每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗
2.樣品中未知物 處理樣品
3.柱未平衡 重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 (尤其是離子對色譜)
4.每天新配,用抗氧化劑
5.水污染(反相) 通過變化平衡時間檢查水質量，用HPLC級的水
(六) 基線噪聲
1.氣泡(尖銳峰) 流動相脫氣,加柱后背壓
2.污染(隨機噪聲) 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑
3.檢測器燈連續噪聲 更換氘燈
4.電干擾(偶然噪聲) 采用穩壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等)
5.檢測器中有氣泡 流動相脫氣,加柱后背壓
(七)峰拖尾
1.柱超載 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相
2.峰干擾 清潔樣品,調整流動相
3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿質鈍化柱，增加緩沖液或鹽的濃度，降低流動相pH值，鈍化樣品
4.死體積或柱外體積過大 連接點降至至低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管
5.柱效下降 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱
(八)峰展寬
1.進樣體積過大
2.在進樣閥中造成峰擴展 進樣前后排出氣泡以降低擴散
3.數據系統采樣速率太慢 設定速率應是每峰大于10點
4.檢測器時間常數過大 設定時間常數為感興趣第一峰半寬的10%
5.流動相粘度過高 增加柱溫,采用低粘度流動相
6.檢測池體積過大 用小體積池,卸下熱交換器
7.保留時間過長 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫
8.柱外體積過大 將連接管徑和連接管長度降至最小
9.樣品過載 進小濃度小體積樣品
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