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DNA 提取實(shí)驗(yàn)中的常見問題解析
分子生物中RNA 和 DNA 提取會(huì)常常遇到一些問題，下面小編就RNA 和 DNA 提取實(shí)驗(yàn)中的通常遇到的幾個(gè)問題進(jìn)行解析。
1.提取產(chǎn)量低
如果您遇到的 DNA/RNA 產(chǎn)量低于您對(duì)樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個(gè)裂解問題。未裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優(yōu)質(zhì)乙醇（100% 200 標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的 DNA 或 RNA。
2.提取低純度
如果提取的 DNA 被蛋白質(zhì)污染（低 260/280），那么您可能開始時(shí)樣品過多，而蛋白質(zhì)沒有去除或溶解。
如果 DNA 的 260/230 比率不佳，則問題通常是結(jié)合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用最高質(zhì)量的乙醇來制備洗滌緩沖液，如果問題仍然存在，請(qǐng)?jiān)俅蜗礈焐V柱。
與其他樣品相比，一些樣品含有更多的抑制劑。環(huán)境樣品特別容易出現(xiàn)純度問題，因?yàn)楦迟|(zhì)在提取過程中會(huì)被溶解。
腐殖質(zhì)的行為與 DNA 相似，很難從硅膠柱中去除。
3.DNA或RNA降解
降解是RNA制備中常常到的問題。因?yàn)樵?RNA 提取過程中，樣品儲(chǔ)存不當(dāng)或裂解效率低等情況都會(huì)導(dǎo)致降解。對(duì)于 DNA 提取，降解不是一個(gè)大問題，因?yàn)閷?duì)于 PCR，DNA 可以被剪切并且工作正常，如果不希望有較多剪切的 DNA，可以使用弱裂解的方法。
PCR 凈化時(shí)的注意事項(xiàng)
PCR 凈化其實(shí)并不是 DNA 提取技術(shù)本身，但它是一種效率高且簡(jiǎn)單的技術(shù)，它只是添加高濃度的結(jié)合鹽（通常每體積 PCR 反應(yīng) 3-5 體積鹽）和離心來過濾。
在實(shí)驗(yàn)過程中，PCR Clean-up 試劑盒出現(xiàn)故障也會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)功虧一簣。
因?yàn)樵赑CR 反應(yīng)中有較多吸收 260 度紫外線的物質(zhì)，比如：核苷酸、去污劑、鹽和引物。所以，PCR 凈化試劑盒經(jīng)常無法正常工作可能是由于 PCR 反應(yīng)失敗所造一般成較難清理。
蘇州阿爾法生物14年專注于科研儀器、實(shí)驗(yàn)室儀器供應(yīng)，提供實(shí)驗(yàn)室儀器包括生物反應(yīng)器、震蕩培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、瑞寧移液器、熒光定量PCR儀、電泳儀、電泳槽、凝膠成像儀、流式細(xì)胞儀、粒徑分析儀等。
1.提取產(chǎn)量低
如果您遇到的 DNA/RNA 產(chǎn)量低于您對(duì)樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個(gè)裂解問題。未裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優(yōu)質(zhì)乙醇（100% 200 標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的 DNA 或 RNA。
2.提取低純度
如果提取的 DNA 被蛋白質(zhì)污染（低 260/280），那么您可能開始時(shí)樣品過多，而蛋白質(zhì)沒有去除或溶解。
如果 DNA 的 260/230 比率不佳，則問題通常是結(jié)合或洗滌緩沖液中的鹽分。確保使用最高質(zhì)量的乙醇來制備洗滌緩沖液，如果問題仍然存在，請(qǐng)?jiān)俅蜗礈焐V柱。
與其他樣品相比，一些樣品含有更多的抑制劑。環(huán)境樣品特別容易出現(xiàn)純度問題，因?yàn)楦迟|(zhì)在提取過程中會(huì)被溶解。
腐殖質(zhì)的行為與 DNA 相似，很難從硅膠柱中去除。
3.DNA或RNA降解
降解是RNA制備中常常到的問題。因?yàn)樵?RNA 提取過程中，樣品儲(chǔ)存不當(dāng)或裂解效率低等情況都會(huì)導(dǎo)致降解。對(duì)于 DNA 提取，降解不是一個(gè)大問題，因?yàn)閷?duì)于 PCR，DNA 可以被剪切并且工作正常，如果不希望有較多剪切的 DNA，可以使用弱裂解的方法。
PCR 凈化時(shí)的注意事項(xiàng)
PCR 凈化其實(shí)并不是 DNA 提取技術(shù)本身，但它是一種效率高且簡(jiǎn)單的技術(shù)，它只是添加高濃度的結(jié)合鹽（通常每體積 PCR 反應(yīng) 3-5 體積鹽）和離心來過濾。
在實(shí)驗(yàn)過程中，PCR Clean-up 試劑盒出現(xiàn)故障也會(huì)導(dǎo)致整個(gè)實(shí)驗(yàn)功虧一簣。
因?yàn)樵赑CR 反應(yīng)中有較多吸收 260 度紫外線的物質(zhì)，比如：核苷酸、去污劑、鹽和引物。所以，PCR 凈化試劑盒經(jīng)常無法正常工作可能是由于 PCR 反應(yīng)失敗所造一般成較難清理。
蘇州阿爾法生物14年專注于科研儀器、實(shí)驗(yàn)室儀器供應(yīng)，提供實(shí)驗(yàn)室儀器包括生物反應(yīng)器、震蕩培養(yǎng)箱、二氧化碳培養(yǎng)箱、瑞寧移液器、熒光定量PCR儀、電泳儀、電泳槽、凝膠成像儀、流式細(xì)胞儀、粒徑分析儀等。
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