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大豆制品中尿素酶活性的測定方法

來源:徐州華納精密儀器有限公司   2011年07月06日 16:54  

方法一:酸度計法

1. 原理:根據(jù)AOCS法,測定出自于大豆及加工產(chǎn)品的尿素酶活化度。

2. 儀器

(1) 可調(diào)節(jié)溫度的恒溫水浴鍋

(2) pH計

(3) 50ml碘瓶

3. 試劑

(1) 磷酸二氫鉀

(2) 磷酸氫二鉀

(3) 尿素[CO(NH2)2]

(4) 甲苯

(5) 0.05M磷酸緩沖液:

磷酸二氫鉀3.403g    100ml水中

                                    混合1000ml,調(diào)pH為7.0

磷酸氫二鉀4.335g    100ml水中

(6) 尿素緩沖液:取分析純尿素15g,溶于500ml磷酸緩沖液,再加5ml甲苯防腐劑(防止霉菌發(fā)酵),調(diào)pH 值為7.0

4. 步驟

                         0.8g樣品+40ml尿素緩沖液

試樣粉碎到0.35mm以下                                    搖勻后放入                        0.8g樣品+40ml磷酸緩沖液

            30℃ 恒溫水浴槽中,每5min搖勻一次,反應(yīng)30min,在5min內(nèi)測定pH值。

5. 計算:尿素酶活化度(pH值上升值)=試樣的pH測定值-空白的pH值

 

 方法二  尿素酶快速測定法——酚紅法(參考法)

稱取0.2g經(jīng)磨細的豆粕樣品放置試管中,注入2%尿素1ml,開始計時,加入指示劑苯酚2滴,再加入8ml蒸餾水,(20-30s)開始震搖試管約10s,直至全脂豆粕浮在液體層,每搖動10s約等待3s,再觀察溶液層顏色,如果出現(xiàn)粉紅色,計下時間,與尿素酶活性表對照,如果顏色不變,則再搖10s約等待3s,然后再觀察溶液層顏色,重復(fù)操作,如一直不變,再重頭開始。(做實驗以前,要先做空白實驗,如果呈粉紅色則指示劑已經(jīng)不能用,重新配置指示劑。震搖停止后觀察溶液的顏色時要等3s,不可太快或太慢,否則會看錯,晚間不能做該實驗。

時間(min)

豆粕尿素酶活性

0-1

0.9以上

1-2

0.9-0.7

2-3

0.7-0.5

3-3.5

0.5-0.4

3.5-4

0.4-0.3

4-4.5

0.3-0.25

4.5-5

0.25-0.2

5-6

0.2-0.15

6-7

0.15-0.1

7-9

0.1-0.05

12無色

0

    

方法三:尿素酶活性快速測定法——酚紅法(粗略法)

1. 原理:尿素酶 + 尿素          氨氣(用酚紅作指示劑)  

2.試劑

(1) N氫氧化鈉:稱0.4g氫氧化鈉溶于100ml水中。

(2) 0.1N硫酸:將2.77ml濃硫酸加入1000ml水中稀釋。

(3) 尿素—酚紅溶液:

0.14g酚紅溶于35ml水中+7ml0.1N氫氧化鈉

                                                混合 0.1N硫酸滴定  琥珀色

           21g尿素溶于300ml水中

方法:將一匙粉碎過的黃豆粕放入小玻皿中,將已調(diào)好的尿素——酚紅溶液加入小玻皿中的豆粕上,直至*錦濕,停留5min,觀察豆粕的紅色反應(yīng)。

少量紅點

微量活躍(△pH=0.05-0.10)

約25%紅點

中度活躍(△pH=0.10-0.25)

約50%紅點

活躍(△pH=0.30-0.50)

約75%紅點

非常活躍(△pH≧2.0)

5min沒紅點出現(xiàn),停留25min任無

豆粕過熟

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