在ELISA檢測實驗中,檢測標本是影響實驗結果的關鍵因素之一。今天上海滬鼎為您分享的內(nèi)容是ELISA檢測試劑盒標本處理過程中的技術問題,希望可以給您的ELISA試劑盒實驗帶來幫助。
一、標本溶血
由于各種人為原因引起的標本溶血,均可因紅細胞破壞溶解時釋放出大量具有過氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過氧化物酶為標記的ELISA測定中,會導致非特異性顯色,ELISA試劑盒干擾測定結果。為克服上述干擾作用,標本采集時必須注意避免溶血。
二、標本受細菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結果。
三、標本保存不當
在冰箱中保存過久的標本,血清中IgG可聚合成多聚體、AFP可形成二聚體,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、甚至造成假陽性;標本放置時間過長(如一天以上),有時抗原或抗體免疫活性減弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為克服上述干擾,ELISA測定的血清標本宜為新鮮采集;如不能立即測定,5天內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,ELISA試劑盒1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。
四、標本管中添加物質的影響
抗凝劑、酶抑制劑及快速分離血清的分離膠等均對ELISA測定有一定干擾作用。
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