一、技術定義與核心原理

原核注射是將外源DNA直接注入受精卵的雄性原核（體積較大且易定位），使外源基因隨機整合至宿主基因組的技術。其核心機制包括：

1. 隨機整合：外源DNA通過非同源末端連接（NHEJ）插入染色體，整合位點與拷貝數不可控。
   

    

2. 原核優勢：雄性原核（由精子形成）比雌性原核更易定位，且DNA修復活性高。

3. 瞬時表達窗口：受精卵處于單細胞期，DNA修復系統活躍，利于外源片段整合。

生物學基礎：
受精后12-24小時為最佳操作窗口（小鼠），此時原核清晰可見。

二、標準化操作流程

（一）前期準備

（二）注射與胚胎移植

• 存活率控制：注射后受精卵存活率需＞80%。

• 移植時機：發育至2細胞期再移植，可提高著床率。

（三）首建鼠（Founder）鑒定

1. 基因型檢測：

• PCR法：提取鼠尾DNA，擴增外源基因。

• Southern Blot：驗證拷貝數與整合完整性。

2. 表達驗證：

• Western Blot（蛋白水平）或RT-PCR（轉錄水平）。

首建鼠特性：
每只Founder為獨立品系（因隨機整合位點不同），需分別建系。