一、技術定義與核心價值

慢病毒轉染是利用改造后的慢病毒載體將外源基因遞送至靶細胞，實現長期穩定表達的基因導入技術。其核心優勢包括：

1. 廣譜細胞適用性：可感染分裂細胞與非分裂細胞（如神經元、干細胞、原代細胞），突破傳統轉染限制 。

2. 高效整合表達：病毒RNA經逆轉錄為DNA后整合至宿主基因組，實現外源基因的yong久性表達 。

3. 低免疫原性：刪除病毒致病基因（如HIV的 tat、rev），顯著降低宿主免疫反應 。

4. 操作便捷性：無需復雜轉染試劑，通過病毒顆粒直接感染細胞 。

術語辨析：

• 轉染（Transfection） ：通常指非病毒介導的核酸導入（如電穿孔、脂質體）。

• 轉導（Transduction） ：特指病毒介導的基因傳遞，慢病毒技術屬于此類 。

二、分子機制：從病毒包裝到基因整合

（一）慢病毒載體系統構成

（二）宿主細胞內的基因遞送流程

1. 病毒進入：VSV-G蛋白結合靶細胞膜受體（如LDLR），介導膜融合 。

2. 逆轉錄與入核：病毒RNA在胞質逆轉錄為cDNA，經整合前復合體（PIC）轉運至核內 。

3. 基因組整合：病毒整合酶（Integrase）將cDNA隨機插入宿主染色體，實現yong久性表達 。

三、標準操作流程與技術優化

（一）病毒包裝與純化（以293T細胞為例）

（二）靶細胞轉染與篩選

1. 感染條件優化：

• 添加聚凝胺（Polybrene，8μg/mL）增強病毒吸附 。

• 感染復數（MOI）測試：通常MOI=5-20（根據細胞類型調整） 。
  

   

2. 穩定株篩選：

• 抗生素篩選：嘌呤霉素（1μg/mL）處理7-14天，清除未轉染細胞 。

• 單克隆擴增：有限稀釋法獲得均一性細胞株 。

關鍵技巧：

• 非分裂細胞（如神經元）需延長感染時間至72小時 。

• 原代細胞建議使用低MOI（≤5）避免毒性 。