一、分子機制與結構特性

（一）系統定義與分類

CRISPR/Cas12b（原稱 C2c1）屬于 Class 2 Type V-B 型 CRISPR 系統，是繼 Cas9 和 Cas12a 后的重要基因編輯工具。其核心特征包括：

1. 雙 RNA 引導機制：

• 需 crRNA 與 tracrRNA（可融合為 sgRNA）共同引導靶向切割，兼具 Cas9 與 Cas12a 的部分特性 。

2. 切割模式：

• 單一 RuvC 結構域 切割雙鏈 DNA，形成 5-6 nt 的黏性末端（5' 突出），利于同源重組修復（HDR）。

3. PAM 識別：

• 依賴 T-rich PAM 序列（如 5'-TTN-3'），擴展了 AT 富集基因組的編輯能力 。

（二）結構優勢

二、技術優勢與性能

（一）核心優勢

1. 低脫靶率：

• GUIDE-seq 檢測顯示脫靶率 顯著低于 Cas9（錯誤插入/缺失減少 >50%）。

2. 高特異性：

• crRNA 引導序列更長（>42 nt），靶向精度更高 。

3. 編輯模式：

• 誘導 純插入突變率低，更傾向于產生小片段缺失，減少功能不可預測性 。

4. 病毒載體適配性：

• 小分子量更易包裝進 AAV 或慢病毒載體，提升體內遞送效率 。

（二）與同類系統對比

注：Cas12b 切割模式使其在 基因治療 中避免產生新表位，降低免疫風險 。

三、應用場景與前沿案例

（一）生物醫學應用

1. 抗病毒治療：

• HIV ：在 T 細胞中單次編輯即可清除全部傳染性 HIV，效率優于 Cas9 。

2. 遺傳病修復：

• 聯合 HDR 通路實現 β-地中海貧血基因精準修復，血紅蛋白恢復至正常水平 。

3. 腫瘤免疫：

• 編輯 PD-1/CTLA-4 雙靶點，降低 CAR-T 細胞耗竭 。