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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

端粒（Telomere）是由多個(gè)重復(fù)核苷酸元件(TTAGGG)所串聯(lián)組成的一段真核細(xì)胞染色體末端的 DNA 序列，除了提供非轉(zhuǎn)錄 DNA 的緩沖物外，還能保護(hù)染色體末端免于融合和退化，保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定和遺傳完整。端粒是一個(gè)人老化速度的最重要和準(zhǔn)確的指標(biāo)，它的初始長(zhǎng)度由遺傳和環(huán)境因素決定，并且會(huì)隨著時(shí)間的推移而減少。有研究表明，端粒長(zhǎng)度與 DNA 修復(fù)、衰老、細(xì)胞凋亡及腫瘤發(fā)生等有密切的聯(lián)系，因此，對(duì)于研究人員來(lái)說(shuō)，準(zhǔn)確而可重復(fù)地測(cè)量端粒長(zhǎng)度尤為重要。本產(chǎn)品主要采用相對(duì)定量 qPCR 來(lái)直接比較樣本的平均端粒長(zhǎng)度，即采用端粒重復(fù)序列（Tel）的拷貝數(shù)與基因組單拷貝基因（SCR）的拷貝數(shù)比值(T/S)作為端粒相對(duì)長(zhǎng)度。單拷貝基因引物(SCR)特異性識(shí)別并擴(kuò)增人類 11 號(hào)染色體上 78bp 長(zhǎng)的區(qū)域。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，用戶只需要提供外周血 DNA 模板。

2.操作只需要半天，比 Southern 雜交檢測(cè)法快 3-5 天時(shí)間。

3.無(wú)非特異性擴(kuò)增。每組引物均已經(jīng)過(guò)擴(kuò)增曲線效率驗(yàn)證（ E>98%， R2>0.99），熔解曲線分析以及凝膠電泳驗(yàn)證。

4.使用 PCR 擴(kuò)增，幾乎每個(gè)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都有相關(guān)設(shè)備，非常方便。

5.本產(chǎn)品足夠 100 次/50 樣的染料法熒光定量 PCR 反應(yīng)。

6.人端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒（染料法qPCR 法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

2×染料法qPCR MasterMix1mL1.5mL 離心管

50× Rox 染料250uL1.5mL 棕色管

超純水1mL1.5mL 離心管

端粒基因引物 (10uM)50uL1.5mL 離心管

單拷貝基因引物 (10uM)50uL1.5mL 離心管

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。

自備試劑

基因組 DNA：在 20μL 體系里可使用 0.5ng 至 5ng 量的基因組 DNA。

使用方法：

一、反應(yīng)體系

建立如下所述的反應(yīng)體系。若要進(jìn)行多個(gè)反應(yīng)，可制備通用組分的預(yù)混液，在每  管或每 孔中加入合適的體積，然后加入特殊的反應(yīng)組分（例如 ：模板）。

1.推薦使用 20μL 體系以保證目的基因擴(kuò)增的有效性和重復(fù)性。

2.蓋上或密封反應(yīng)管/PCR 板 ，輕輕混勻。可以稍微離心 ，確保所有組分都在管底。

3.將反應(yīng)體系置于熒光定量 PCR 儀中 ，收集數(shù)據(jù)并分析結(jié)果。按下表所示設(shè)置您的 PCR 儀。最適溫度 和孵育時(shí)間可視具體情形而定。

*ROX 染 料

可根據(jù)選擇的儀器在反應(yīng)體系中加入 ROX 染料 ， 將反應(yīng)體系中的熒光信號(hào)標(biāo)準(zhǔn)化。下表所列為使用 不同儀器操作時(shí)所需的 ROX 量（每 50µL 反應(yīng)體系）：

三步法擴(kuò)增程序：

階段循環(huán)數(shù)溫度時(shí)間

預(yù)變性1x95℃1min

變性

35-40x95℃10 sec

退火55℃30 sec

延伸72℃45 sec

熔解曲線 (Melt Curve)

注：決定最佳退火溫度的主要因素為引物長(zhǎng)度及引物堿基組成。根據(jù)試劑盒  端粒及 SCR 引物組的特性 ，我們建議退火溫度設(shè)置為 55℃。

結(jié)果分析

定量實(shí)驗(yàn)至少需要三個(gè)生物學(xué)重復(fù)。反應(yīng)結(jié)束后需要確認(rèn)擴(kuò)增曲線及熔解曲線。

使用的 2^-ΔΔCt 法 (Livak 法)進(jìn)行的計(jì)算 得到 T/S 的比值作為端粒的相對(duì)長(zhǎng)度

選擇我們的人端粒長(zhǎng)度檢測(cè)試劑盒（染料法qPCR 法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！