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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是在本公司過(guò)柱法植物 RNA 提取試劑盒的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)配方和流程優(yōu)化得到的無(wú)酚無(wú)氯仿升級(jí)產(chǎn)品，它結(jié)合了植物 RNA 提取試劑盒的高效性、快捷性以及無(wú)氯仿處理的安全性。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.免酚和氯仿處理，操作安全可靠。

2.簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約十分鐘。

3.RNA 純度更高，平均OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。

4.目前已測(cè)試過(guò)上百種植物。

5.得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交和 cDNA 合成等實(shí)驗(yàn)。

6.本產(chǎn)品足夠 50 次微量提取，每次可以處理 50-200 mg 植物材料。

7.性價(jià)比高于進(jìn)口的柱式植物 RNA 提取產(chǎn)品。

8.無(wú)酚無(wú)氯仿植物RNA-提取試劑盒（過(guò)柱法）只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分規(guī)格包裝

無(wú)酚無(wú)氯仿植物 RNA 提取溶液A50 mL60 mL 本色瓶

無(wú)酚無(wú)氯仿植物 RNA 提取溶液 B50 mL60 mL 本色瓶

離心吸附柱（寬口）30 套塑料袋

通用洗柱液50 mL60 mL 本色瓶

RNA 洗脫液10 mL10 mL 本色瓶

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸及保存，有效期一年。

自備試劑

無(wú)

使用方法：

注意：如果無(wú)酚無(wú)氯仿植物 RNA 提取溶液 A（以下簡(jiǎn)稱溶液 A）低溫下可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹-底溶解并充分搖勻后再取用。

1.估算組織細(xì)胞的用量。每次微量提取一般需要 50-100 mg 植物葉片、或 30-50 mg 植物種子、或 100-200 mg 植物果實(shí)。不能多加，否則容易堵柱。無(wú)氯仿提取處理的量比常規(guī)的加氯仿處理量要少一倍，否則非常容易堵柱，但是否堵柱又取決于植物組織的多糖多酚的濃度。

2.勻漿法裂解樣品:先將新鮮植物組織-剪切成小塊放入 10-15 mL 塑料離心管中， 加入 1 mL 溶液A，然后用勻漿器勻漿 5-20 秒。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。

3.或液氮研磨法裂解樣品（適用于復(fù)雜，易降解樣品）：取適量新鮮植物組織放入含液氮的研缽中，迅速將組織研磨成粉末后，將粉末轉(zhuǎn)移到合適的塑料離心管中， 加入 1 mL 溶液 A，立即劇烈振蕩 20 秒，充分混勻。

4.將勻漿物或液氮研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5mL 塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。有的植物組織(比如果實(shí))含有大量水份，勻漿液會(huì)多于 1 mL，轉(zhuǎn)移時(shí)也只取 1 mL。

5.室溫 15000 g 離心 3-5 分鐘，管底沉淀為細(xì)胞破碎物。

6.將上清液 (約 1 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的 2 mL 塑料離心管中。

7.加入等體積的無(wú)酚無(wú)氯仿植物 RNA 提取溶液 B，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生(對(duì)某些植物，屬于正常現(xiàn)象)，不必去掉沉淀，把所有的混合物上柱。

8.將 0.7 mL 的混合溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，15000 g 室溫離心 3 到 5 分鐘， 棄穿透液。如果離心吸附柱里面有殘留液體沒(méi)穿透，可以延長(zhǎng)離心時(shí)間直到徹-底穿透。

9.將剩下的混合溶液按每次 0.7 mL 的方式轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，每次 15000 g 室溫離心 3-5 分鐘，棄穿透液。

10.由于混合液有 2mL 左右，所以三次轉(zhuǎn)移即可將混合液全部掛柱。

11.加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫 15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。如果離心吸附柱里面有殘留液體沒(méi)穿透，可以延長(zhǎng)離心時(shí)間直到徹-底穿透。

12.再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫 15000 g 離心半分鐘，棄穿透液。

13.15000 rpm 室溫離心 10 秒以便去除殘留液體。此步很重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響 RNA 的使用。

14.將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50 μL RNA 洗脫液，室溫放置 2 分鐘。

15.15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

16.RNA 完整性的電泳檢測(cè):如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA 分子。

17.RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將 5-10μL RNA 溶于TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測(cè)其在 OD260 的光吸收。通過(guò)光吸收可以得出 RNA 濃度(1 OD260 的 RNA=40 μg/mL)，進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量(濃度×體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/組織用量)。

18.RNA 純度測(cè)定:無(wú)污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。

選擇我們的無(wú)酚無(wú)氯仿植物RNA-提取試劑盒（過(guò)柱法），就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！