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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

石蠟包埋切片 DNA 樣本、血液游離 DNA 樣本、法醫(yī) DNA 樣本和考古 DNA 樣本都是非常重要的實(shí)驗(yàn)材料，但是這些材料的 DNA 不但含量稀少，而且往往都高度降解，使用前都需要先進(jìn)行擴(kuò)增。目前進(jìn)行擴(kuò)增的方法很多，包括 PEP-PCR、DOP-PCR、MDA、SCOMP，balanced-PCR 等，但各有缺點(diǎn)，不盡人意。為此，本公司結(jié)合 DNA 環(huán)化技術(shù)和 RCA 滾環(huán)擴(kuò)增技術(shù)，對(duì)痕量 DNA 進(jìn)行擴(kuò)增。其原理示意圖如下：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，十分簡(jiǎn)單方便，用戶不需要辛苦摸索條件。

2.直接使用純化的線狀 dsDNA 為模板。本產(chǎn)品不包括純化試劑盒。如果 DNA 是古舊的有損傷的 DNA，需要使用另外的試劑盒（痕量古舊 DNA 修復(fù)及擴(kuò)增試劑盒）。

3.最-低可以使用 5pg 的模板 DNA（一個(gè)人體細(xì)胞的 DNA 為 6pg），最后可以擴(kuò)增上 1 千-1 萬(wàn)倍（起始模板DNA 越少，擴(kuò)增倍數(shù)越高）。

4.優(yōu)化的反應(yīng)體系，所有反應(yīng)一管式完成，避免了珍貴痕量樣本的丟失。

5.使用高保真的phi29 DNA 聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增，避免了在擴(kuò)增過(guò)程中引入新突變。

6.擴(kuò)增試劑含熒光染料，可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增反應(yīng)過(guò)程，不需要跑電泳檢測(cè)，節(jié)約寶貴的擴(kuò)增后樣品。

7.本產(chǎn)品足夠 50 次 20uL 體系的環(huán)化-擴(kuò)增反應(yīng)。

8.得到的 DNA 可以直接用于二代測(cè)序、酶切或qPCR 等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

9.痕量 DNA 滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液100 uL0.5mL 白蓋管

DNA 環(huán)化酶 A25 uL0.5mL 紅蓋管

DNA 環(huán)化酶B25 uL0.5mL 紅蓋管

RCA 專用隨機(jī)引物溶解液10 uL0.5mL 綠蓋管

RCA 專用隨機(jī)引物干粉50 次0.5mL 本色管

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL50 uL0.5mL 紅蓋管

超純水1mL1mL1.5mL 藍(lán)蓋管

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

樣本 DNA 純化試劑盒、DNA 片段回收試劑盒（從 RCA 反應(yīng)體系中回收擴(kuò)增產(chǎn)物）

使用方法：

一、DNA 環(huán)化

1.首-次使用本試劑盒時(shí)，需要在 RCA 專用隨機(jī)引物溶解液化凍后，將 110uL 全部加入到 RCA 專用隨機(jī)引物干粉管中，渦旋震蕩半分鐘溶解，短暫離心，得 RCA 專用隨機(jī)引物。放冰上待用。沒(méi)用完的需要放-20℃長(zhǎng)期保存。

2.按下表在 200uL 的PCR 管中設(shè)置和進(jìn)行 DNA 環(huán)化-擴(kuò)增反應(yīng)：

成分管 1（樣本）管 2

（無(wú)模板對(duì)照）

自備模板 DNA（5pg-100ng）1-8.5 uL不加

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液1 uL1 uL

超純水加到 9.5 uL加到 9.5 uL

DNA 環(huán)化酶 A0.5 uL0.5 uL

合計(jì)10 uL10 uL

在 PCR 儀器上 37℃ 2 小時(shí)，65℃ 20 分鐘滅活酶

超純水4.0 uL4.0 uL

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液0.5 uL0.5 uL

DNA 環(huán)化酶 B0.5 uL0.5 uL

合計(jì)15 uL15 uL

室溫放置 2 小時(shí)，65℃ 10 分鐘滅活酶

超純水1.5 uL1.5 uL

10×DNA 環(huán)化-擴(kuò)增緩沖液0.5 uL0.5 uL

RCA 專用隨機(jī)引物溶液2 uL2 uL

合計(jì)19 uL19 uL

放在PCR 儀器上，設(shè)置 95℃加熱 5 小時(shí)，自然冷卻到室溫。

再加入下列成分

phi29 DNA 聚合酶，10U/uL1 uL1 uL

混勻后放熒光定量PCR 儀器上，設(shè)置 30℃保溫 16 小時(shí)，每 10 分鐘

設(shè)置成一個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)采集一次 SYBR 通道的熒光信號(hào)。

二、數(shù)據(jù)分析

3.由于是可以實(shí)時(shí)檢測(cè)RCA 擴(kuò)增反應(yīng)，所以RCA 擴(kuò)增反應(yīng)不一定進(jìn)行 16 小時(shí)， 可以在擴(kuò)增熒光信號(hào)的曲線進(jìn)入平臺(tái)期（已經(jīng)沒(méi)有新的 DNA 合成）后結(jié)束。因?yàn)?phi29 DNA 聚合酶有很強(qiáng)的 3-5 外切酶活性，在擴(kuò)增反應(yīng)耗盡 dNTP 后，它可能會(huì)進(jìn)入酶切模式，逐漸降解已經(jīng)合成的 DNA。

4.65℃保溫 10 分鐘滅活酶。由于 phi29 DNA 聚合酶有很強(qiáng)的 3-5 外切酶活性， 因此必須滅活，否則它將逐漸降解反應(yīng)管中已經(jīng)合成的 DNA。

5.典型實(shí)驗(yàn)結(jié)果。有擴(kuò)增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線，無(wú)模板對(duì)照將沒(méi)有此擴(kuò)增曲線（見(jiàn)下圖）：

6.如果沒(méi)有熒光定量 PCR 儀器，則只能電泳檢測(cè)或PCR 檢測(cè)是否有擴(kuò)增。

7.擴(kuò)增所得 DNA 可以用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如 qPCR 擴(kuò)增。如果后續(xù)實(shí)驗(yàn)需要純化去除dNTP（如通過(guò)測(cè) OD 確定濃度）或去除 RCA 專用隨機(jī)引物，則需要自備試劑盒進(jìn)行純化處理。

選擇我們的痕量 DNA 滾環(huán)擴(kuò)增試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！