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產品簡介：

本產品為在 PAGE 凝膠或蛋白免疫印記硝酸纖維素膜上檢測糖蛋白的試劑盒。

產品特點：

1.一站式，用戶不要單獨配制所需成分，簡單快捷。

2.提供一種陽性對照蛋白及一種陰性對照蛋白，便于分析問題。

3.專一性強，通過共價修飾方式檢測糖基，不檢測蛋白部分。

4.快捷，只需不到 2 小時，而其他的染色方法需要 4-5 小時。

5.染色后的糖蛋白為品紅色條帶，背景為淺粉色或者無色

6.靈敏度高，理論上可以達到微克級別，但實際應用時靈敏度跟靶蛋白的糖基化程度相關。

7.可以用于 SDS-PAGE 和 2D 電泳的凝膠檢測，也可以用于瓊脂糖凝膠電泳的檢測

（但背景較高），還可以用于硝酸纖維素印跡膜的檢測。

8.本產品足夠染色 10 張mini-PAGE 膠或 20 張 8×8 cm 的蛋白印跡纖維素膜。

9.糖蛋白染色試劑盒(PAGE 膠專用)只可用于科研。

產品參數：

成分規格包裝

氧化試劑2.5 g2 mL 棕色管

還原試劑1.25 g2 mL 本蓋管

糖蛋白染色試劑250 mL250 mL 本色瓶

陽性對照（卵白蛋白）CAS：

9006-59-11 mg0.5 mL 黃蓋管

陰性對照（大豆胰-蛋白酶抑制劑）1 mg0.5 mL 橙蓋管

250 mL 本色塑料瓶（空）無2 個無

使用手冊1 份1 份

運輸及保存

常溫運輸和保存，陽性對照和陰性對照干粉需要 4℃或更低溫度長期保存，有效期一年。

注：糖蛋白染色試劑的有效期只有半年（從出廠時間開始計算）。

自備試劑

甲醇、冰醋酸、超純水、1×SDS-PAGE 上樣緩沖液等。

使用方法：

實驗前準備

1.配制 3%醋酸溶液：將 30 mL 自備的冰醋酸與 970 mL 超純水混勻，室溫保存備用。

2.配制 50%甲醇溶液：將 250 mL 自備的甲醇與 250 mL 超純水混勻，室溫保存備用。

3.配制氧化試劑溶液：將本試劑盒提供的氧化試劑干粉轉移到本試劑盒提供的 250 mL

空本色塑料瓶中，然后加入 250 mL 的 3%醋酸溶液（第 1 步配制），充分混勻溶解后得到氧化試劑溶液，室溫保存備用。

4.配制還原試劑溶液：將本試劑盒提供的還原試劑干粉轉移到本試劑盒提供的 250 mL 空本色塑料瓶中，然后加入 250 mL 的超純水，充分混勻溶解后得到還原試劑溶液， 室溫保存備用。

5.配制陽性對照（卵白蛋白）溶液：向裝有 1 mg 卵白蛋白固體的管中加入 1 mL 1× SDS-PAGE 上樣緩沖液（自備），所得卵白蛋白溶液的濃度為 1mg/mL，然后分裝成 100 μL/管共 10 管，留下一管當天使用，其余的放-20℃長期保存。對于 80 mm

×80 mm 的凝膠來說，每條泳道加 10 μL 的陽性對照溶液即可。

6.配制陰性對照（大豆胰-蛋白酶抑制劑）溶液：向裝有 1 mg 大豆胰-蛋白酶抑制劑干粉的管中加入 1×SDS-PAGE 上樣緩沖液（自備），所得大豆胰-蛋白酶抑制劑溶液的濃度為 1 mg/mL，然后分裝成 100 μL/管共 10 管，留下一管當天使用，其余的放- 20℃長期保存。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來說，每個泳道加 10 μL 的陰性對照溶液即可。

7.樣品稀釋：用 SDS-PAGE 上樣緩沖液將蛋白樣品濃度稀釋為 1 mg/mL，SDS-PAGE上樣緩沖液終濃度為 1×。對于 80 mm×80 mm 的凝膠來說，每個泳道加 10 μL的樣品。

凝膠染色的操作步驟（注意:請在通風櫥中進行以下操作）

8.取出電泳后的 SDS-PAGE 凝膠，加入到裝有 100 mL 50%甲醇溶液的器皿中，完-全浸泡 30 分鐘后，倒出甲醇溶液。

9.用 100 mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。

10.將 PAGE 膠塊轉移到裝有 25 mL 氧化試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。

11.用 100 mL 3%醋酸溶液洗滌膠塊 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。

12.將膠塊轉移到裝有 25 mL 糖蛋白染色試劑的器皿中，輕輕振蕩 15 分鐘。（注：若染色試劑中有晶體析出，只需取上清液即可，不要加熱溶解晶體。）

13.將膠塊轉移到裝有 25 mL 還原試劑的器皿中，輕輕振蕩 5 分鐘。

14.用 3%醋酸溶液洗滌膠塊，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現為品紅條帶。膠塊保存在 3%醋酸溶液中。

硝化纖維素膜染色的操作步驟（注意:請在通風櫥中進行以下操作）

15.用 20 mL 3%醋酸溶液洗滌膜兩次，每次輕輕振蕩 10 分鐘。

16.將膜轉移到 10 mL 的氧化試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。

17.用 10 mL 3%醋酸溶液洗滌膜 3 次，每次輕輕振蕩 5 分鐘。

18.將膜轉移到 10 mL 的糖蛋白染色試劑中，輕輕振蕩 15 分鐘。注意：若染色試劑中有晶體析出，只需離心取上清液去除晶體即可，不要加熱來溶解晶體。

19.將膜轉移到 10 mL 還原試劑中，輕輕振蕩 5 分鐘。

20.用 3%醋酸溶液洗滌膜，然后用超純水洗滌至顯色，糖蛋白將顯現為品紅條帶。膜可保存在 3%醋酸溶液中。

21.檢測后如果沒有條帶，可以用轉膜后的 PAGE 膠進行檢測，因為糖蛋白（尤其是高度

糖基化的蛋白）轉膜效果比較差。

選擇我們的糖蛋白染色試劑盒(PAGE 膠專用)，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！