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產品簡介：

RT-LAMP MasterMix 含有 RT-LAMP 擴增所需的所有成分， 可以用于RT-LAMP 等溫擴增。RT-LAMP 即 Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification（逆轉錄-環介導等溫擴增），它利用 4 條模板專一的特異引物、逆轉錄酶和具有鏈置換能力的 Bst DNA 聚合酶，在等溫條件下(63℃左右) 30－60 分鐘完成逆轉錄和 LAMP 擴增。該技術在靈敏度、特異性和檢測范圍等指標上能媲美甚至優于定性 RT-PCR 技術，同時還不需要昂貴的儀器設備。目前已成功應用于生物的快速檢測，廣泛用于各個領域。

產品特點：

1.即開即用，含有紅色電泳示蹤劑，擴增后可以直接上樣，不需要上樣液。

2.高特異性，精心優化的配方，非特異擴增比自配的試劑更低。

3.高擴增效率，一般比 RT-PCR 靈敏一個數量級。

4.65℃左右逆轉錄和等溫擴增，不需要貴重儀器。

5.本試劑盒足夠 50 次 20 ?L 體系的 RT-LAMP 擴增。

6.提供擴增對照，便于在遇到困難時分析原因。

7.20 ?L 體系可以加 10 ?L 的模板。

8.RT-LAMP MasterMix（電泳法）只能用于科研，不能用于臨床。

產品參數：

產品規格

成分規格包裝

RT-LAMP MasterMix

（含電泳示蹤劑，待加酶）200 ?L0.5 mL 白蓋管

逆轉錄酶-擴增酶混合液100 ?L0.5 mL 紅蓋管

陽性對照模板-引物混合物50 ?L0.5 mL 藍蓋管

使用手冊1 份無

保存和運輸

低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

RNA 模板、RT-LAMP 引物

使用方法：

1.制備模板RNA：用于選用合適的方法制備模板RNA。如果有N個樣品，最好設置N+2個樣品制備，多出的兩個一個是樣品制備陽性對照，一個是樣品制備陰性對照。

2.配制5×RT-LAMP引物混合液。

先加超純水將合成的HPLC級別的下列引物干粉稀釋到標準所標注的母液濃度，然后在一新的離心管中按表中所列體積加入各種引物母液和超純水，最后

得到1 mL的5×RT-LAMP 引物混合液，此混合液足夠250次20 ?L體系的LAMP擴增。如果需要配制的5×RT-LAMP引物混合液體積異于1 mL，則各成分的用量請按比例調整。引物混合液可以在-20℃放置2年。

注：如果沒有Loop引物，則用水替代。

3.在冰上融化RT-LAMP MasterMix（待加酶），混勻，稍離心。第一次使用時， 請將100uL 逆轉錄酶-擴增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix中并輕柔混勻，然后再使用。如果有N個樣品，則在N+2個反應管中加入以下組份，  多出的一管是RT-LAMP擴增陽性對照（PC），一管是RT-LAMP擴增陰性對照

（NC）：

成份N+2 個樣品管RT-LAMP

擴增PCRT-LAMP

擴增 NC

RT-LAMP MasterMix

（加酶后）6 ?L6 ?L6 ?L

自備 5×RT-LAMP 引物

混合液4 ?L不加4 ?L

陽性對照模板-引物混合物不加4 ?L不加

自備模板 RNA1-6 ?L不加不加

補自備超純水到20 ?L20 ?L20 ?L

注意：由于本產品含有電泳示蹤劑，不宜加入可視化染料，否則會產生顏色干擾?？杉尤肽承晒馊玖?，具體可以加入哪些，需要預先測試電泳示蹤劑對熒光染料的影響。如果加入了熒光染料，則需要在熒光定量PCR儀上進行反應和實時檢測。

4.混勻，置于65℃保溫60分鐘。如果是在PCR儀中保溫，必須加熱蓋。如果用金 屬浴或水浴保溫，沒有熱蓋，必須覆蓋50uL的石蠟油，否則保溫期間反應體系的水分會蒸發，嚴重影響反應效率。

5.擴增結束后取5-10 ?L擴增產物直接上樣（本產品含有紅色電泳示蹤劑，不需要再加上樣液，紅色示蹤劑的泳動速度相當于50 bp的DNA）進行2-3%的瓊脂糖凝膠電泳，有RT-LAMP擴增的樣品將可見LAMP特征性DNA梯度電泳圖譜

6.結果分析：如果本試劑盒提供的陽性對照-引物混合物能夠擴增而陰性對照不能擴出，則實驗有效。如果陽性對照-引物混合物沒有擴增出條帶，則試劑盒的問題，請跟廠家聯系。如果陰性對照（水作為模板）有擴增出條帶，則說明RT-LAMP 樣品或試劑有過去的擴增產物的污染，需要注意操作的規范性，如果不能解決，

可以重新設計RT-LAMP引物擴增新的靶片段。

選擇我們的RT-LAMP MasterMix（電泳法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！