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產品簡介：

本試劑盒用于質粒 DNA 小量制備與純化。基于改良后的堿變性法，用堿使基因組 DNA 和質粒 DNA 均變性，再用酸中和，質粒 DNA 可以快速復性，而基因組 DNA 不能快速復性，故可以通過離心去除。除去基因組 DNA 后的含質粒DNA 的上清用離心吸附柱吸附質粒 DNA，洗去雜質，即可得到純化的質粒 DNA。

產品特點：

1.快速、步驟少，整個操作在 30 分鐘左右完成。

2.不需要預平衡離心吸附柱。

3.通用洗柱液即開即用，不需要用戶額外加乙醇。

4.溶液 B 中有藍色染料，便于目測非常關鍵的堿變性和中和反應兩步的溶液混勻狀況，保證實驗效果。

5.產量高，一次可以處理 1-4mL 過夜培養的 G+菌液，每毫升過夜培養的細菌可以提取到 2-5μg/mL（取決于質粒是高拷貝、中拷貝還是低拷貝）。

6.本產品足夠 50 次微量提取。

7.純度高，采用本試劑盒提取的質粒 OD 比值在 1.8-2.0 之間，可以直接用于酶切、轉化、測序及 PCR 等。

8.質粒DNA純化試劑盒（過柱法）只能用于科研。

產品參數：

產品規格

保存和運輸

常溫運輸和保存，RNase A 溶液需要-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

無

使用方法：

1. 從篩選平板上挑取單菌落至含抗生素的培養基中，37℃震蕩培養 12-16 小時（搖床轉速 200-300）。注意：建議使用 LB 培養基，營養更豐富的培養基會使菌體濃度過高，超過純化系統的處理能力而降低質粒 DNA 的質量。

另外，延長培養時間會因細胞死亡、裂解而造成質粒 DNA 濃度降低。

2.用 1.5mL 離心管收集 1-4mL 過夜培養飽和菌液，室溫 12,000rpm 離心 1分鐘，棄上清，再短暫離心，吸棄殘留液體。

3.第一次使用本試劑盒時，先將本試劑盒提供的全部 RNase A 溶液加入到質粒 DNA 純化溶液 A（簡稱溶液 A，下同）中，搖勻后再取用，未用完的溶液 A 放 4℃保存。

4.加入 250μL 溶液 A 到第 2 步得到的細菌沉淀中，用槍頭充分吹打使菌體重懸。注意：細胞未充分懸浮會影響后續堿變性，可以使用漩渦振蕩器混勻或  使用槍頭吸頭吹打沉淀至完-全混勻。

5.加入 250μL 質粒DNA 純化溶液 B（下面簡稱溶液 B，如果溶液 B 在低溫放置產生沉淀，須 37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用），溫和顛倒 4-6 次混勻，藍色將變得均勻并且溶液將變得粘稠。注意：千萬不要劇烈振蕩，否  則基因組 DNA 斷裂產生的片段非常容易污染質粒 DNA。

6.冰上放置不超過 5 分鐘。注意：冰上放置不要超過 5 分鐘，否則質粒 DNA 會有堿損傷。溶液 B 用后需要將蓋擰緊存放，否則空氣中的二氧化碳會進入溶液，形成碳酸，中和溶液 B 中的堿，降低其效率。如果溶液 B 顏色不是藍色，則表示變質，應該棄之不用并且跟廠家聯系。

7.加入 350μL 冰上預冷的質粒DNA 純化溶液C（下面簡稱溶液 C），溫和反復顛倒 4-6 次，溶液將變成無色，將有白色絮狀沉淀產生。

8.冰上放置至少 5 分鐘讓質粒 DNA 復性。不能短于 5 分鐘，一般 10 分鐘。

9.12,000rpm 離心 3 分鐘，小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大，部分絮狀物懸浮在上清液中屬正常現象，吸取上清時避開這  些懸浮物即可。如果此步的離心在 4℃進行，可減輕沉淀物漂浮。

10.靜置 2 分鐘以讓質粒 DNA 與離心吸附柱充分結合。

11.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中的廢液。

12.加入 500μL 的通用洗柱液到離心吸附柱中，室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，棄收集管中廢液。注意：通用洗柱液中含乙醇，每次用后需要將蓋擰緊存放，  否則乙醇會揮發。

13.重復上步 1 次。

14.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，甩干殘留液體。此步不能省略，否則殘留乙醇會影響 DNA 的后續使用（如殘留乙醇使 DNA 溶液在電泳上樣時不能沉淀到加樣孔中）。

15.將離心吸附柱置于一個新的 1.5mL 塑料離心管（自備）中，加入 30-100μ L65-80℃預熱的 DNA 洗脫液（基因組 DNA 專用），室溫放置 2 分鐘。

16.室溫 12,000rpm 離心 1 分鐘，離心管底溶液即質粒 DNA 溶液。

選擇我們的質粒DNA純化試劑盒（過柱法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！